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目的:采用体外实验方法,通过间接培养方式,分别观察煤尘、矽尘通过THP-1单核细胞源巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞(MRC-5)中纤维化相关基因COL-I、COL-III、a-SMA表达变化,Thy-1 mRNA表达及其DNA甲基化的变化、DNA甲基化相关基因DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达变化,观察煤尘、矽尘致人胚肺成纤维细胞纤维化改变中Thy-1是否发生DNA甲基化。方法:采用四唑盐2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(CCK-8)比色法确定煤尘液和矽尘工作液分别染毒单核细胞源巨噬细胞浓度;用含500nmol/L佛波酯(PMA)的1640培养液培养THP-1单核细胞,24h诱导分化后成单核细胞源巨噬细胞,分别收集100μg/mL煤尘工作液染毒巨噬细胞24h的培养上清液和100μg/mL矽尘工作液染毒后培养上清液,进而刺激人胚肺成纤维细胞24h、48h、72h,分别进行以下实验:1.酶联免疫分析(ELISA)法测定巨噬细胞中IL-6、TGF-b1蛋白含量和人胚肺成纤维细胞中TGF-b1、COL-I、COL-III、a-SMA蛋白含量;2.实时荧光定量PCR法检测人胚肺成纤维细胞中COL-I、COL-III、a-SMA、Thy-1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达;3.巢式降落式甲基化特异性PCR(nM-PCR)法检测Thy-1 DNA甲基化。结果(1)不同浓度煤尘、矽尘工作液(0、25、50、100、150、200μg/mL)染毒单核细胞源性巨噬细胞,在150、200μg/mL剂量组与对照组比较,细胞增殖活性明显降低,呈现剂量依赖关系,差异有显著性(P﹤0.05)。(2)煤尘、矽尘工作液(100μg/mL)染毒巨噬细胞后,IL-6、TGF-b1表达升高,与对照组比较,有显著性差异(P﹤0.05)。(3)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72h,TGF-b1、COL-I、COL-III、a-SMA mRNA和蛋白表达均明显高于对照组,并且随着染毒时间增加,表达逐渐升高,呈现时间效应关系(R<0.05)。(4)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72h Thy-1mRNA表达逐渐降低,呈现时间效应关系(P﹤0.05)。(5)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72h Thy-1DNA甲基化水平逐渐升高,与对照组比较,有显著性意义(P﹤0.05)。(6)煤尘、矽尘工作液染毒巨噬细胞后上清液刺激人胚肺成纤维细胞24h,48h和72hDNMT1、3a、3b表达逐渐升高(P﹤0.05),其中煤尘组24h DNMT3a,矽尘组48h DNMT3b mRNA表达与对照组比较降低,无显著性意义。结论(1)煤尘、矽尘可促使巨噬细胞中IL-6和TGF-b1表达升高,发生炎性改变。(2)通过间接培养方式,巨噬细胞上清中炎性因子的作用下导致MRC-5细胞中TGF-b1表达异常。(3)MRC-5细胞中TGF-b1表达异常可促进MRC-5细胞纤维化改变。(4)在MRC-5细胞纤维化改变的过程中,Thy-1表达逐渐降低。(5)在DNA甲基化转移酶的作用下,Thy-1DNA序列发生甲基化。