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目的1.比较劈牙取髓和脱钙制作牙体-牙髓联合切片两种方法,在牙髓的实验研究方面的优缺点。2.应用免疫组化研究不同发育阶段人牙髓VEGF,Flt-1,Flk-1的表达及受体的相关性。3.应用RT-PCR从基因水平研究不同发育阶段人牙髓VEGF、Flt-1、Flk-1的基因表达及受体的相关性。方法1.制备牙髓组织切片及牙体-牙髓联合切片,HE染色。通过制备程序、组织学观察等分析两种方法的优缺点。2.选取临床上因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙,分为两组:Ⅰ根尖孔未闭合,Ⅱ根尖孔完全闭合。采用实验一筛选的方法制备切片,进行VEGF,Flt-1,Flk-1免疫组化染色,通过Image-Pro Plus 6.0和SPSS17.0软件行分析统计。3.提取不同发育阶段人牙髓组织总RNA,采用RT-PCR技术从基因水平初步探究VEGF及其受体在牙体发育成熟中的作用机制,实验分组及测定指标同2。结果1.劈牙取髓操作简便快捷,组织固定、脱水等容易掌握,但不易保证组织完整性,牙髓各部不易区分,适用于需要新鲜牙髓的实验研究。脱钙制作牙体-牙髓联合切片工序较繁琐,脱钙、组织固定、脱水等不易掌握,但牙髓保存完整,牙髓各部定位明确,适用于牙髓的组织学观察研究。2.通过免疫组织化学染色观察,发现在年轻恒牙中VEGF,Flk-1的表达高于成熟恒牙且以根尖部最为显著(P<0.05);Flt-1在年轻恒牙中的表达低于成熟恒牙(P<0.05);Flt-1,Flk-1呈显著负相关性表达(P<0.01)。3.琼脂糖凝胶电泳显示:VEGF、Flt-1、Flk-1的mRNA扩增对应片段长度为145bp、169bp、162bp。通过RT-PCR检测,得出年轻恒牙VEGF及其受体Flt-1、Flk-1的表达分别是成熟恒牙的1.7倍及0.6倍、1.5倍(P<0.05),与免疫组化所得的结果基本一致。结论1.牙体脱钙制作牙体-牙髓联合切片能较大程度保全牙髓,实验结果客观真实,在需对牙髓各部分进行定性和定量分析研究中值得推荐。2.VEGF, Flt-1,Flk-1在人正常牙髓组织中,随着根尖孔的闭合呈现不同特征表达,参与了牙髓的发育和成熟。