肺动脉高压大鼠骨髓间充质干细胞的生物学功能

来源 :泰山医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:moniter2001
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目的通过研究肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的增殖、血管形成能力并其探讨生物学特性。为BMSCs移植治疗PAH提供初步的实验依据。方法在大鼠腹腔内给予10%野百合碱(60mg/kg)注射建立肺动脉高压模型,按体重注射相应体积生理盐水制作正常组模型;MCT注射3周后同时测定PAH组和正常组大鼠肺血流动力学参数(平均肺动脉压)、测左心室(LV)、室间隔(S)及右心室(RV)质量,利用RV/(LV+S)计算得到右心室肥厚指数RVHI;H.E染色观察肺小动脉壁结构;通过血球自动分析仪测定大鼠静脉血中的中性粒细胞百分比;密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养PAH组和正常组大鼠BMSCs,倒置显微镜下观察并用照相机拍照BMSCs形态;用流式细胞仪仪器检测细胞多个表面抗原来综合鉴定BMSCs,并在体外进行血管形成实验;CCK-8法测定BMSCs的生长曲线。结果1.野百合碱注射3周后,较正常组大鼠,PAH组大鼠mPAP和RVHI明显升高(P<0.01)。2.静脉血分析:与正常组大鼠相比,PAH组大鼠中性粒细胞百分比显著升高(P<0.01)。3.H.E染色切片显示PAH组大鼠肺小动脉管壁较正常组大鼠显著增厚。4.流式细胞仪仪器检测大鼠BMSCs表面标志:较正常组大鼠,PAH组大鼠BMSCs阳性表面标志CD44、CD90表达率显著减少(P<0.05),阴性表面标志CD31、CD34、CD45表达率显著增加(P<0.05)。5.PAH组大鼠BMSCs较正常组大鼠生长增殖能力均明显下降。6.血管形成实验:与正常组大鼠BMSCs比较,PAH组大鼠BMSCs形成血管腔数显著减少(P<0.01)。结论1、通过采用在腹腔内注射野百合碱的方法成功制作大鼠肺动脉高压模型。2、PAH大鼠体内存在炎症。3、采用Ficoll密度梯度离心法联合贴壁筛选法得到骨髓间充质干细胞,但PAH组大鼠BMSCs纯度低。4、PAH组大鼠BMSCs的生长、增殖及血管形成能力减低。
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