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背景：卵巢上皮性癌起源于卵巢表面上皮，是最致命的女性生殖系统恶性肿瘤，其预后差，死亡率居妇科恶性肿瘤之首。卵巢上皮性癌有多种不同的组织学类型：包括浆液性癌、粘液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌等。其中浆液性癌是最常见的组织学类型，占全部上皮性卵巢癌的一半以上。目前，有关卵巢上皮性癌的发生机制、分子遗传学和流行病学资料仍未完全阐明，而且不同组织学类型的卵巢上皮性癌在发生机制和预后等方面都存在许多差异。
近年来，随着对卵巢浆液性癌的临床病理形态学特征的的深入了解和分子遗传学的发展，有关卵巢浆液性癌的发生机制和临床病理形态特征有了新的认识，并初步建立了卵巢低级别浆液性癌与高级别浆液性癌存在不同的发病机制的二元论模型：低分级浆液性癌通过良性一交界性一恶性过程逐步发展形成，而高分级浆液性癌是从正常卵巢表面上皮、包涵囊肿或输卵管上皮直接发展形成。但有关浆液性卵巢癌的发生机制尚未完全阐明，低级别的浆液性卵巢癌的发生是否经过良性一交界性一恶性过程逐步演变形成还需要分子遗传学方面进一步证实，与高级别浆液性癌之间是否存在某些共同的分子病理基础仍然是关注的焦点问题。
目的：本研究运用免疫组织化学、RT-PCR、FCM和蛋白印迹方法检测卵巢浆液性良性肿瘤、交界性肿瘤和浆液性癌中，ARHI、WWOX和PTEN表达的变化规律，分析其与重要的信号转导转录因子STAT3和E2F1的相关性，探讨上述三种抑癌基因的表达变化规律及其可能的调控机制在卵巢浆液性癌发生中的意义。同时运用Kaplan-Meier单因素生存分析，筛选影响卵巢浆液性癌预后的相关因素，判断各因素是否为独立的预测因素及各因素的预测价值，Cox多因素生存分析比较各因素对预后影响的程度，确定各因素的风险系数，评估分析抑癌基因ARHI、WWOX和PTEN蛋白表达情况对判断卵巢浆液性癌预后的价值。
方法：
1.研究对象：选取2000年1月至2003年6月河北医科大学第二医院临床资料完整、经手术切除并经病理证实并有随访记录的卵巢浆液性癌标本56例，卵巢浆液性良性肿瘤35例，卵巢浆液性交界性肿瘤18例，另取因其他疾病手术切除的正常卵巢组织25例。用于各指标蛋白表达的免疫组织化学检测及预后多因素分析。留取河北医科大学第四医院2006～2008年因卵巢肿瘤收住院接受手术治疗患者的新鲜肿瘤组织93例，其中卵巢浆液性癌45例，卵巢浆液性良性肿瘤32例，卵巢浆液性交界性肿瘤16例，另取正常卵巢组织15例。用于mRNA的检测、FCM和蛋白印迹。
2.免疫组织化学:采用免疫组织化学二步法检测各指标蛋白的表达。步骤按二步法免疫组化检测试剂盒进行。苏木素轻度复染，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜观察。阴性对照以磷酸盐缓冲液（PBs）代替一抗而其他条件均相同。
3.流式细胞定量检测（FCM）:分别取冻存的各肿瘤组织，4％甲醛固定，流式细胞定量检测各指标蛋白表达情况。
4.细胞总蛋白的提取和定量:胞浆裂解液分别加入，以提取细胞的总蛋白。将提取的蛋白应用紫外分光光度计进行定量。
5.蛋白印迹:经SDS-PAGE电泳、转膜后，ECL发光法显示各蛋白阳性荧光条带，由X线胶片感光将结果记录下来，扫描后再经Bio1D图像分析系统对杂交条带进行定量分析。以β-肌动蛋白（β-actin）表达作为内参照，以各蛋白与β-肌动蛋白的比值分别表示其相对表达量。
6.细胞总RNA的提取、鉴定及定量:采用异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA。1％琼脂糖电泳鉴定其完整性。紫外分光光度计进行定量。
7.RT-PCR:反转录合成cDNA，建立PCR反应体系，94℃变性5min，94℃50s，56℃30s，72℃30s，30次循环扩增，PCR产物1.5％琼脂糖凝胶电泳90V40min。采用凝胶分析软件（BIO-LD）进行定量，以目的基因与内参照基因基因GAPDH的比值表示目的基因相对表达量。
8.卵巢浆液性癌预后Kaplan-Meier单因素及COX多因素分析:对56例有随访的卵巢浆液性癌患者进行总结分析，分别以36个月和60个月为研究截止点，计算3年和5年生存率。分析抑癌基因与患者预后的关系，并筛选确定影响预后的相关因素，COX多因素生存分析确定独立的预后因素及影响程度。
9.统计学处理与分析:采用SPSS13.0软件进行统计学处理，计数资料比较采用行×列表资料的x2检验，多个样本率的两两比较采用分割法：计量资料采用单因素方差分析，用SNK法进行两两比较；Spearman等级相关分析各指标间的相关关系：Kaplan-Meier单因素生存分析，计算患者生存率，Log-Rank检验比较生存率间差异有无显著性，筛选预后相关因素，判断各因素是否为独立的预测因素及各因素的预测价值，Cox多因素生存分析比较各因素对预后影响的程度，确定各因素的风险系数。检验水准α=0.05。
结论：
1.抑癌基因ARHI、WWOX和PTEN的mRNA和蛋白表达在卵巢浆液性癌中都存在不同程度的降低和缺失，提示卵巢浆液性癌发生过程中三种抑癌基因均丧失了抑癌基因的功能，从而在卵巢浆液性癌的发生中发挥了一定的作用。
2.抑癌基因ARHI mRNA和蛋白表达降低或缺失程度高于WWOX和PTEN基因，提示三个抑癌基因中ARHI可能在卵巢浆液性癌的发生中起关键作用。
3.不同级别的卵巢浆液性癌中抑癌基因表达存在差异，进一步证实低级别和高级别浆液性癌存在不同的发生机制。
4.STAT3和E2F1在卵巢浆液性癌中表达增强，提示E2F1蛋白过表达抑制了ARHI的表达，从而失去了对STAT3的负性调节作用，进一步激活下游一系列促增殖抑凋亡的基因，可能是卵巢浆液性癌的调控机制之一。
5.除传统的预后因素外，抑癌基因ARHI、WWOX和PTEN蛋白表达也是影响卵巢浆液性癌的预后相关因素，而且ARHI是独立的预后因素，可能成为卵巢浆液性癌基因治疗的新靶点。
6.综合分析包括抑癌基因ARHI、WWOX和PTEN蛋白表达在内的各种预后因素，有助于指导临床更加准确的评价患者的预后和合理治疗。