【摘 要】
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目的:为了寻找血吸虫病新的免疫学诊断候选分子,在大肠杆菌中克隆、表达日本血吸虫(SjP7)蛋白,建立纯化重组抗原间接ELISA方法(rSjP7-ELISA)诊断日本血吸虫病。 方法:设计
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目的:为了寻找血吸虫病新的免疫学诊断候选分子,在大肠杆菌中克隆、表达日本血吸虫(SjP7)蛋白,建立纯化重组抗原间接ELISA方法(rSjP7-ELISA)诊断日本血吸虫病。 方法:设计引物,用PCR法扩增出SjP7样蛋白基因编码基因序列,T载体连接,再将其亚克隆入pET28a(+)表达载体中,经酶切、测序证实正确后,用IPTG对该重组菌诱导表达,SDS-PAGE和Western blot验证表达量和免疫活性。将纯化的rSjP7蛋白和SjAWA包被反应板,确定其最适抗原包被量和血清稀释度,用rSjP7-ELISA和SjAWA-ELISA方法平行检测38血吸虫病患者血清;26份钩虫病患者血清以及40份正常对照者血清中特异性抗体,比较不同抗原之间敏感性,特异性以及交叉反应性。 结果:PCR法扩增出一条大小约为423bp大小的SjP7样蛋白的DNA片断,将其亚克隆表达质粒pET28a(+),测序证实具有完整的ORF。诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约可见一条约20KDa大小的6-HIS融合蛋白条带,该融合蛋白均可被经预吸收后阳性病人血清所识别。纯化的rSjP7样蛋白作为抗原做ELISA与SjAWA-ELISA方法平行检测血吸虫病患者、钩虫病患者和正常对照者血清,结果显示:rSjP7-ELISA和SjAWA-ELISA,对于38份血吸虫病患者血清检测的敏感性分别为86.8％和92.1%;26份钩虫病患者血清抗体的阳性率分别为12.5%和25.0%,在40份正常对照者血清中,rSjP7-ELISA和SjAWA-ELISA均出现1例阳性;经校正χ2检验两两间均无显著性差异(p>0.05)。 结论:本研究扩增克隆、表达并纯化了SjP7样蛋白,在实验室中rSjP7-ELISA法诊断血吸虫病,与SjAWA-ELISA法有着相似的敏感性、特异性,表明rSjP7蛋白在血吸虫病免疫诊断上具有较大的应用潜能。
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