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目的:优化ELISA检测HBsAg的操作步骤，探索快速准确的最佳检测模式。 方法:随机选取1000例住院患者，分为五个实验组，根据试剂说明书设定的常规ELISA方法和改良ELISA方法对HBsAg进行检测，并用确证试验进行验证。本实验通过采血后放置时间:4h与30 min;离心条件:2860×g相对离与1610×g相对离心力下离心10 min;孵育时间:未延长与延长15m in;洗板次数:5次和3次;比色条件:450nm/630nm双波长比色与450nm单波长比色这五方面，比较常规方法和改良方法的特异度和敏感度，最终选择灵敏度和特异度较高的模式为最佳模式，进而优化ELISA检测HBsAg的操作步骤。 结果:放置4h组灵敏度为94.74％，特异度为98.90％;放置30min组灵敏度为89.47％，特异度为95.03％。2860×g相对离心力下离心5min组灵敏度为85.71％，特异度为96.51％;1610×g相对离心力下离心10min组灵敏度为92.86％，特异度为99.42％。未延长孵育时间组灵敏度为91.18％，特异度为96.39％;延长孵育时间15 min组灵敏度为97.06％，特异度为98.80％。洗板5次组灵敏度为94.74％，特异度为99.38％;洗板3次组灵敏度为94.74％，特异度为97.53％。450nm/630 nm双波长比色组灵敏度为97.14％，特异度为98.79％;450 nm单波长比色组灵敏度为94.29％，特异度为97.58％。 结论:(1)采血后放置时间4h优于30m in;(2)1610×g相对离心力下离心10min优于2860×g相对离心力下离心5min;(3)第一次孵育时间75 min，第二次孵育时间45 min优于第一次孵育时间60 min，第二次孵育时间30 min;(4)洗板5次优于洗板3次;(5)450nm和630 nm双波长比色优于450nm单波长比色。