【摘 要】
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目的:1.构建针对Livin的慢病毒基因沉默载体,以降低Livin基因的表达;2.沉默Livin基因,研究口腔癌细胞Cal 27对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的变化,并探索其可能的机制,为口腔癌化疗耐受的靶向治疗提供新的思路。方法:1.设计针对Livin基因的shRNA序列,构建慢病毒plv-shRNA重组质粒;2.plv-shRNA重组质粒包装为慢病毒颗粒并感染Cal 27细胞,经过相
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目的:1.构建针对Livin的慢病毒基因沉默载体,以降低Livin基因的表达;2.沉默Livin基因,研究口腔癌细胞Cal 27对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的变化,并探索其可能的机制,为口腔癌化疗耐受的靶向治疗提供新的思路。方法:1.设计针对Livin基因的shRNA序列,构建慢病毒plv-shRNA重组质粒;2.plv-shRNA重组质粒包装为慢病毒颗粒并感染Cal 27细胞,经过相应抗生素筛选,获得稳定沉默Livin基因的细胞株;3.20μM、40μM、60μM的5-FU处理Livin沉默细胞和对照细胞24h,通过流式细胞术测定细胞凋亡率,MTT法检测细胞活力。结果:1.成功构建了针对Livin基因的plv-shRNA重组质粒;2.plv-shRNA重组质粒包装为慢病毒颗粒,感染Cal 27细胞并通过筛选实验得到了稳定沉默Livin的细胞株;3.Western-blot和RT-qPCR验证了plv-shRNA慢病毒感染的Cal27细胞中Livin的降低,且pro-Caspase 3表达量上升;4.降低Livin表达后,Cal 27细胞对5-FU的敏感性上升,流式细胞术测定Cal 27凋亡率提高,MTT检测Cal 27的细胞活力下降,结果具有统计学差异（P<0.05）。结论:通过慢病毒介导的shRNA降低了Cal 27细胞Livin基因的表达,增加了Cal 27对5-氟尿嘧啶（5-FU）的敏感性,机制与Caspase 3活化有关,Livin基因可为研究口腔癌化疗耐受提供一定帮助。
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