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背景:感染创面已成为严重危害全球公共健康的主要因素之一,由于病程迁延,经久不愈常常进展为慢性创面。研究发现,几乎所有慢性创面中都含有细菌生物膜（Biofilm,BF）,它严重阻碍了创面愈合,清除生物膜能有效促进慢性创面愈合。铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PAO）是慢性创面感染的常见病原体。近年来,由于抗生素的不当使用,PAO呈现多重耐药趋势,给临床抗感染治疗带来了巨大挑战。PAO的耐药机制十分复杂,其中,BF形成是PAO产生耐药性的重要机制,清除BF目前已成为治疗慢性创面的研究热点,可是单一治疗措施无法将慢性创面BF彻底清除,常需多种治疗方法联合治疗。银离子敷料可以杀灭细菌、抑制BF生成并能促进伤口愈合,但长期的使用会产生耐银性及一定的毒性,麦卢卡蜂蜜可以杀灭细菌,抑制BF的形成并破坏已形成的BF,研究发现其类凝胶的形态能减少银的毒性,并在杀菌的同时也为银等杀菌材料提供条件。因此,本研究将探索二者联用对PAO感染创面及BF的影响,为临床医生治疗感染性创面提供理论依据和新的治疗思路。目的:对比研究麦卢卡蜂蜜联合银离子敷料治疗对PAO感染创面及BF的影响。方法:选用30只清洁级SD大鼠,于其背部脊柱两侧分别制作2个直径为10.0mm的急性皮肤软组织损伤创面,深及肌层表面（创面相距10.0mm）,采用随机数字法随机选取6只大鼠作为空白对照组（BLANK组）,行无菌纱布覆盖创面治疗;选取另外24只大鼠为创面感染组,于术后3天创面均匀涂抹约1×106CFU PAO菌液,半透明膜覆盖,24小时后去除半透明膜,以此建立PAO感染创面（临床1×105CFU/g即可达到感染标准）。切取创面组织行石蜡切片荧光染色后,荧光显微镜下观察到生物膜（红色）形成,则感染创面模型建立成功。创面感染组4个创面依次分别用0.10ml麦卢卡蜂蜜覆盖创面治疗（HONEY组）、直径为10.0mm银离子抗菌敷料覆盖创面治疗（AG组）、直径为10.0mm的银离子敷料覆盖创面后加用0.10ml麦卢卡蜂蜜治疗（HONEY+AG组）及无菌纱布覆盖创面（INFECTION组）。每隔2天换药一次。分别于术后第1天、4天、7天、10天、13天于创面感染组随机选取4只大鼠及空白对照组选取1只大鼠进行一般情况观察并采集组织标本,采用检测创面pH值、计算创面愈合率及创面组织细菌数量、对组织进行切片、HE（Hematoxylin and eosin,HE）染色、免疫荧光染色及超薄切片染色后,于荧光显微镜、激光共聚焦显微及透射电镜等观察下比较各组创面标本中生物膜及创面愈合的情况。实验数据采用IBM SPSS Statistics 26软件进行统计学分析并绘制统计图,所测得创面pH值、细菌数量及创面愈合率均以Mean±SD表示,多样本之间的比较选用方差分析;所测得BF面积采用Image Pro Plus专业图像分析软件进行分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1.大体观察:大鼠在术后观察周期内全部存活良好,精神好,活动性好,进食饮水状态同术前,无腹泻,无躁动不安等表现。治疗后第1天起,创面感染组各组肉芽组织逐渐增生,治疗后第4天,HONEY+AG组创面新生大量肉芽组织与周围皮肤平齐,未见明显菌落;HONEY组、AG组创面被覆浅绿色菌落及其分泌物,创面底部及边缘可见大量肉芽组织增生;INFECTION组创面可见少许新生肉芽组织,被覆浅绿色菌落及脓性分泌物,伴随明显恶臭。第13天,BLANK组及HONEY+AG组创面基本愈合;AG组创面未见明显菌落及分泌物,新生大量肉芽组织基本与周围皮肤平齐;INFECTION组创面但可见部分浅绿色菌落及脓性分泌物。2.pH值检测:治疗后各组pH值从第4天起逐渐降低,HONEY+AG组创面pH值随时间降低趋势最为明显,INFECTION组pH值基本无变化,维持在8左右,其余各组降低趋势低于HONEY+AG组;治疗后第7天,HONEY+AG组pH值7.78±0.13明显低于INFECTION组的8.38±0.32（P<0.001）、HONEY组的7.85±0.13（P<0.001）、AG组的7.7±0.14（P=0.002）。3.PAO数量和BF含量:治疗后第1天,创面感染组PAO数量均略升高,直至第4天各组PAO数量开始减少,比较各时间点PAO数量:HONEY+AG组减少趋势较单一治疗组更明显,最终于第13天稳定在3log CFU/g左右。治疗后第7天,HONEY+AG组创面组织PAO数量低至6.37±0.21log CFU/g（低于临床感染标准）,均低于HONEY组PAO数量8.49±2.0log CFU/g（P<0.001）、AG组PAO数量7.67±0.51log CFU/g（P<0.001）及INFECTION组PAO数量8.8±0.29log CFU/g（P<0.001）;治疗后第7天,HONEY+AG组创面BF被基本破坏（面积为205像素）,INFECTION组（面积为244179像素）、HONEY组（面积为109043像素）及AG组（面积为106966像素）仍有部分BF未被破坏,HONEY+AG组BF清除程度明显优于其余三组（P<0.001,P=0.047,P=0.045）。4.创面愈合率:治疗后第1天HONEY+AG组创面开始愈合,其余各组第4天起创面逐渐愈合,各检测时间点HONEY+AG组创面愈合率明显优于单一治疗组,治疗后第13天HONEY+AG组及BLANK组创面愈合率已达98.01±0.53、96.02±2.04。治疗后第7天,HONEY+AG组愈合率达82.75±2.03%,明显高于BLANK组58.06±5.39%、INFECTION组40.45±13.41%、HONEY组56.54±12.74%及AG组57.72±7.69%（P=0.002,P<0.001,P=0.001,P=0.002）;INFECTION组愈合率最低为40.45±13.41%,低于BLANK组58.06±5.39%（P=0.017）;而HONEY及AG组愈合率分别高于INFECTIONG组（P=0.028,P=0.019）。5.病理结果:HONEY+AG组相较于单一治疗组感染早期激活炎症反应,并更早出现新生毛细血管、纤维母细胞及毛囊增生。治疗后第4天,HONEY+AG组可见部分新生毛细血管、纤维母细胞及较多中性粒细胞,炎症减轻且轻于INFECTION、HONEY及AG组,可见部分多核巨细胞;HONEY组及AG组可见较多中性粒细胞,炎症较前减轻,可见部分糜烂、出血及炎性渗出,少量新生毛细血管,少量纤维母细胞增生;INFECTION组中性粒细胞较前无明显变化,炎症较前略微减轻,但组间相较最为严重,并可见大量出血及糜烂。结论:麦卢卡蜂蜜联合银离子敷料应用PAO感染创面可以有效降低创面pH值、促进炎症细胞募集、新生毛细血管形成、杀菌、破坏已形成的生物膜,从而促进创面愈合。