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白鸡屎藤含挥发油,属苗医“冷药”,可“熏蒸”治疗苗医“热病”,但关于“熏蒸”疗法和白鸡屎藤挥发油研究尚不深入,缺少定量研究数据支持。本研究在优化干品和鲜品白鸡屎藤挥发油提取条件的基础上,提取白鸡屎藤挥发油并测定其化学成分和含量,通过白鸡屎藤挥发油滴鼻给药定量模拟白鸡屎藤的“熏蒸”过程,利用高效液相色谱技术研究白鸡屎藤挥发油多个化学成分的药动学特征、白鸡屎藤挥发油药效学作用及其防治雏鸡肠炎沙门氏菌病的效果,探讨白鸡屎藤挥发油滴鼻给药防治肠炎沙门氏菌病的化学成分和药理学机制,阐明苗医“熏蒸”疗法的现代药理学机制和“热病冷治”理论对畜禽疾病的辨证论治过程。试验共分如下五个部分:
1.白鸡屎藤挥发油提取工艺研究试验考察了鲜品和干品白鸡屎藤挥发油提取的前处理因素,通过正交试验方法优化了干品和鲜品白鸡屎藤挥发油提取的前处理超声条件及其提取工艺,并论证了白鸡屎藤的采集季节。试验结果如下:
试验确立鲜品白鸡屎藤挥发油最佳提取条件:鲜品白鸡屎藤剪碎在组织匀浆机冰水浴中10000～15000r/min上下研磨10min制成组织匀浆,超声粉碎功率200W、超声次数50次(每次超声2s,间隙时间8s)超声处理,加水倍数6倍,不浸泡缓慢加热至微沸蒸馏20min;干品白鸡屎藤挥发油最佳提取工艺条件:粉碎过40目筛,超声粉碎功率400W、超声次数100次(超声2s,间隙8s)超声处理,8倍加水量,不浸泡缓慢加热至微沸蒸馏4h。为保证所提挥发油的质量,通过鲜品和干品白鸡屎藤挥发油提取时间和提取条件的进一步比较,试验拟选择鲜品白鸡屎藤进行挥发油提取。同时,白鸡屎藤一般采集季节应在小暑与大暑之间,其挥发油含量最高,是采集白鸡屎藤最佳时节。
2.白鸡屎藤挥发油化学成分的定性定量研究试验采用化学方法和高效液相色谱技术,建立了白鸡屎藤挥发油主要化学成分的定性定量测试方法,对白鸡屎藤挥发油的化学成分进行了定性、定量研究。试验结果如下:
鲜品和干品白鸡屎藤挥发油均含有酸类、酚类、醛或酮类、醇类、酯或内酯类,主要包括芳樟醇、龙脑、樟脑、左旋α-松油醇、右旋α-松油醇、水杨酸甲酯、丁香酚和异丁香酚等化学成分。比较发现鲜品白鸡屎藤挥发油化学成分丁香酚、异丁香酚、左旋α-松油醇、右旋α-松油醇、芳樟醇、水杨酸甲酯、樟脑、龙脑等化学成分含量占其挥发油总量的54％,干品白鸡屎藤挥发油以上化学成分含量占其挥发油总量的46％,并且干品和鲜品白鸡屎藤挥发油均以芳樟醇、龙脑含量最高,丁香酚、异丁香酚、左旋α-松油醇、右旋α-松油醇、樟脑含量次之。
3.鲜品白鸡屎藤挥发油化学成分药动学特征研究7日龄三黄鸡120只分成高剂量组(100μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)和低剂量组(25μg/mL),滴鼻给药1mL/d。采用高效液相色谱技术测定滴鼻给药后不同时间点白鸡屎藤挥发油化学成分芳樟醇、龙脑、樟脑、左旋α-松油醇、右旋α-松油醇、水杨酸甲酯、丁香酚和异丁香酚的血浆药物浓度,并用3P97药动学程序对所得数据进行分析。试验结果如下:
高剂量白鸡屎藤挥发油可显著提高芳樟醇、水杨酸甲酯、樟脑、龙脑、丁香酚、异丁香酚的达峰浓度,延长龙脑的吸收半衰期,延长左旋α-松油醇、右旋α-松油醇、龙脑、丁香酚和异丁香酚的消除半衰期,延长左旋α-松油醇、右旋α-松油醇在体内保持较高血药浓度的时间,延长丁香酚、异丁香酚在体内滞留时间,缩短龙脑在体内的滞留时间,缩短丁香酚、异丁香酚的吸收半衰期和达峰时间。研究结果表明,不同剂量白鸡屎藤挥发油滴鼻给药,其吸收、分布、消除过程是不同的。
4.白鸡屎藤挥发油药效学研究通过白鸡屎藤挥发油在二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠扭体、肠炎沙门氏菌内毒素致热、体外抗菌抗毒素等试验上的应用,探讨了鲜品白鸡屎藤挥发油抗炎、镇痛、解热、抗菌、抗毒素等药理作用。试验结果如下:
白鸡屎藤挥发油具有抗炎、镇痛、解热、抗菌、抗毒素作用,并且与浓度呈正相关,主要是白鸡屎藤挥发油芳樟醇、水杨酸甲酯、龙脑、樟脑、丁香酚、异丁香酚、左旋Q-松油醇、右旋α-松油醇等酸类、酚类、醛类药理活性成分共同作用的结果。基于白鸡屎藤挥发油的抗菌、抗毒素、镇痛、解热、抗炎作用,验证了白鸡屎藤具有“冷治”作用,属苗医“冷药”。
5.白鸡屎藤挥发油防治雏鸡肠炎沙门氏菌病研究试验利用肠炎沙门氏菌成功造苗医“热病”模型,通过白鸡屎藤挥发油滴鼻给药,观察患鸡临床症状、病理剖检特征,测定患鸡血液生化指标,探讨白鸡屎藤挥发油防治雏鸡肠炎沙门氏菌病的药理学作用与机制。试验结果如下:
雏鸡肠炎沙门氏菌病以急性败血症为特征,可作为苗医“热病”模型。白鸡屎藤挥发油可用于雏鸡肠炎沙门氏菌病的防治,其防治作用机理不但与白鸡屎藤挥发油的抗菌、抗毒素、抗炎和解热镇痛作用有关,还与其肠粘膜保护作用、抗氧化作用、保肝作用和免疫力提升作用有关。试验模拟苗医“熏蒸”治疗过程,验证了苗医“熏蒸”疗法的现代药理学机制和苗医“热病冷治”理论对雏鸡肠炎沙门氏菌病的辨证论治过程。