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目的研究前房免疫微环境与角膜移植免疫排斥反应之间的关系，进一步揭示角膜免疫排斥反应的发生机理。方法1、实验分组A组，同系移植组：供体为BALB／c小鼠，受体为BALB／c小鼠。B组，异系移植组：供体为C57BL／6小鼠，受体为BALB／c小鼠。C组，正常健康的BALB／c小鼠，不作任何处理。2、大体观察术后3天拆除眼睑缝线，采用裂隙灯显微镜观察角膜植片透明情况，前两周每天观察，之后所有小鼠每周观察2～3次至术后2个月。3、免疫组织化学方法检测免疫细胞的变化情况(1)眼球冰冻切片术后3天、7天、10天、排斥时及1.5月，随机从各组抽取2只小鼠，颈椎脱臼法处死小鼠后取右侧眼球，冰冻切片检测MHCⅡ、CD4及F4／80的浸润情况。(2)虹膜睫状体组织铺片术后5、10天、排斥及1.5月时，从A、B两组各取8只小鼠，分离虹膜组织。另取8只正常BALB／c小鼠，作为正常对照。应用抗原提呈细胞的标记MHCⅡ分子，巨噬细胞的标志F4／80以及共刺激分子CD86／CD80，和CD4+T淋巴细胞标记，检测角膜移植术后不同动物模型不同时间虹膜组织中免疫细胞的变化情况并观察它们与角膜移植免疫排斥反应的关系。4、分子生物学方法检测虹膜睫状体组织中细胞因子的表达术后5、7、10天及排斥时，从A、B两组分别随机选取2只小鼠，另取2只正常BALB／C小鼠作为正常对照。采用RT-PCR方法检测角膜移植术后不同时间虹膜睫状体组织中的CCR5、CCR7、IL-12、IL-4的表达。应用Image-J图象分析软件统计每条目的基因与内参的光密度比值，各组进行比较，SPSS11.5统计软件进行分析。(P＜0.05为差别有显著意义)结果1、大体观察B组小鼠术后角膜植片逐渐水肿混浊，新生血管长入，于12～20天内发生免疫排斥反应；A组小鼠角膜植片在观察时间内始终保持透明。2、免疫组织化学方法检测虹膜睫状体组织细胞的变化情况MHCⅡ：眼球冰冻切片显示正常小鼠角巩膜缘及虹膜组织基质层散在分布MHCⅡ+的细胞，穿透性角膜移植术(PK)后MHCⅡ+细胞逐渐向角膜中央浸润(植片)，至排斥时可见植片、植床及虹膜组织均有大量MHCⅡ+细胞浸润。虹膜睫状体铺片显示正常虹膜睫状体组织存在树枝状MHCⅡ+细胞。A组，PK术后均可见虹膜组织树枝状的MHCⅡ+细胞表达，较正常的虹膜组织未见明显的变化(F=1.425，P=0.271)。而B组，PK术后5天可见虹膜组织MHCⅡ+细胞数量明显减少，且以圆形或不规则形为主；PK术后10天MHCⅡ+细胞数量较5天时又明显增多且多呈圆形，PK术后18天，虹膜组织MHCⅡ+细胞明显增多达高峰，树枝状、圆形及不规则形共存。F4／80：眼球冰冻切片显示正常小鼠角膜深基质层及虹膜基质层可见散在的F4／80+细胞，PK术后浸润的细胞数量逐渐增多，至排斥时达高峰。虹膜睫状体铺片显示正常虹膜睫状体组织存在F4／80+细胞，近瞳孔区呈树枝状，近睫状体侧呈圆形。A组，PK术后均可见虹膜组织F4／80+细胞表达，较正常的虹膜组织未见明显的变化(F=0.291，P=0.831)。而B组，PK术后F4／80+细胞的浸润逐渐增多，至免疫排斥反应时最多。共刺激分子：正常小鼠虹膜组织仅见少量CD86／CD80+细胞浸润，A组小鼠角膜移植术后虹膜组织中共刺激分子的表达未见明显的变化(F=0.028，P=0.870)。B组小鼠角膜移植术后5天时CD86／CD80+细胞的浸润增多，但较正常未见明显的变化(P=0.881)，10天时明显增多至排斥时至高峰。CD4+T淋巴细胞：眼球冰冻切片显示B组PK术后3天角膜植床、植片及虹膜睫状体均未见明显CD4+T淋巴细胞浸润；5天时在角巩膜缘及睫状体根部开始出现少量的CD4+T淋巴细胞浸润；7天时，CD4+T淋巴细胞逐渐向植片浸润；至排斥时可见植片、植床及虹膜睫状体组织大量的CD4+T淋巴细胞浸润。虹膜睫状体组织铺片显示正常小鼠虹膜睫状体组织未见CD4+T淋巴细胞浸润。A组，PK术后5天，10天，18天时，仅见散在的CD4+T淋巴细胞浸润(F=0.078，P=0.786)。而B组，PK术后5天可见少量的CD4+T淋巴细胞浸润，10天时CD4+T淋巴细胞浸润略增加，而排斥时达高峰，可见大量的CD4+T淋巴细胞浸润。分子生物学方法检测虹膜睫状体组织中细胞因子的表达RT-PCR检测发现，B组小鼠术后5，7，10天和排斥时均检测到趋化性因子受体CCR5、CCR7的表达，且逐渐增多，至排斥时达高峰。IL-12在正常及A组小鼠虹膜睫状体组织均无表达，B组角膜移植术后IL-12表达量逐渐增加，在排斥时最多。而IL-4在术后不同时间的不同组织均未见表达。结论角膜移植免疫排斥反应时，眼前房免疫微环境发生了改变，出现了大量的高表达MHCⅡ分子和共刺激分子的抗原提呈细胞及CD4+T淋巴细胞，这些细胞的活性发生了改变。眼前房免疫微环境的改变很可能是导致角膜移植术后免疫排斥反应另一重要因素。