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目的:本课题建立弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞模型,并采用自噬促进剂或阻断剂进行干预来研究自噬和炎性体的相互关系,进而探讨自噬对弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞炎症应答的影响,从而为宿主抗弓形虫感染的固有免疫应答机制提供科学依据,为弓形虫病防治新思路提供实验依据。方法:1.建立弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞模型,Giemsa染色观察弓形虫感染巨噬细胞和CCK-8检测细胞存活率,确定弓形虫以1:1的比例感染巨噬细胞的最佳时间;2.Western Blot检测弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞的自噬水平(LC3)和炎性体水平(ASC);3.采用自噬促进剂雷帕霉素或自噬阻断剂巴弗洛霉素A1预处理小鼠腹腔巨噬细胞后感染弓形虫,Western Blot检测其自噬水平(LC3、p62)、炎性体水平(ASC),ELISA检测IL-1β,CCK-8检测细胞存活率,Real-time PCR检测巨噬细胞极化表面标志(iNOS、IL-12、Arg1、IL-10)和弓形虫速殖子表面抗原1(SAG1)。结果:1.确定弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞的最佳时间为4h;2.和对照组相比,弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞4h,可引起LC3和ASC蛋白表达增多,差异均具有统计学意义(P<0.01);采用雷帕霉素促进自噬后,LC3蛋白表达增多,p62蛋白表达减少,ASC蛋白表达减少(P<0.05);而巴弗洛霉素A1阻断自噬后,LC3、p62和ASC蛋白表达增多(P<0.01);3.和对照组相比,单独LPS刺激或者单独弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞均不能引起IL-1β分泌增多(P>0.05);而采用LPS预刺激小鼠腹腔巨噬细胞2h后再加入弓形虫感染4h,IL-1β分泌水平明显升高(P<0.001);与LPS刺激且弓形虫感染组相比,雷帕霉素促进自噬和巴弗洛霉素A1阻断自噬后,IL-1β分泌水平降低(P<0.05);4.和对照组相比,弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞4h后细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),感染6h后其显著降低(P<0.001),而加入雷帕霉素、巴弗洛霉素A1或DMSO处理后,弓形虫感染4h或6h的细胞存活率与弓形虫感染组相比差异均无统计学意义(P>0.05);5.和对照组相比,弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞24h时,M1的指标iNOS mRNA表达水平升高(P<0.05),IL-12 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);而M2的指标Arg1和IL-10 mRNA的表达显著增加(P<0.01);和弓形虫感染组相比,采用雷帕霉素促进自噬后,仅Arg1 mRNA表达水平降低(P<0.05),iNOS、IL-12和IL-10 mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05);巴弗洛霉素A1阻断自噬后,M1指标iNOS和IL-12 mRNA表达显著增加(P<0.01),而M2指标Arg1和IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);6.和弓形虫感染组相比,采用雷帕霉素和巴弗洛霉素A1处理后,SAG1mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论:1.弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞可以引起自噬和炎性体水平升高,自噬对炎症可能具有负调节作用;2.自噬可能并不影响弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞存活率;3.弓形虫感染可以诱导巨噬细胞向M2极化,而在阻断自噬后向M1极化;4.雷帕霉素增强自噬或巴弗洛霉素A1阻断自噬均可以促进弓形虫在巨噬细胞中的增殖,但其机制有待进一步探讨。