【摘 要】
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该文试图通过比较苹果旭和其柱型突变体威赛克赤霉素合成限速酶基因序列的差异来探讨威赛克柱型突变的可能机理.应用RT-PCR技术,共克隆比较了三个主要限速酶GA20-氧化酶、古
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该文试图通过比较苹果旭和其柱型突变体威赛克赤霉素合成限速酶基因序列的差异来探讨威赛克柱型突变的可能机理.应用RT-PCR技术,共克隆比较了三个主要限速酶GA20-氧化酶、古巴二磷酸合成酶(CPS)和内根-贝壳杉烯合成酶(KS)的基因片段.使用根据GA20-氧化酶保守区设计的引物,分别从旭和威赛克克隆到一个800bp片段,这两个片段的推断氨基酸序列与富士苹果赤霉素20-氧化酶的一致性均为98.14%.在核酸水平,这两个片段仅存在两个碱基的差异,其中一个碱基的变化导致一个氨基酸位点的改变,即由旭中的苏氨酸(T)变为威赛克中的甲硫氨酸(M),从而引起一个可能的豆蔻基N-豆蔻酰化位点在威赛克中的丧失.这个位点的突变可能对该酶的活性和赤霉素的合成水平产生负影响.根据CPS基因和KS基因保守区设计的兼并引物,在旭和威赛克中均扩增得到符合期望大小的产物.Blast搜索和序列比对表明扩增片段与拟南芥、南瓜、曙南芥等其他来源的CPS基因和KS基因同源性很低,KS扩增片段可能为26S rRNA大亚基同源序列.威赛克柱型突变的机理与赤霉素生物合成的关系需要进行一步验证和更深入的工作.
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