【摘 要】
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为探讨hBMP-6在骨折后的愈合治疗和原发性骨质疏松症的防治中的潜在前景,我们采用RT-PCR、cDNA克隆、质粒表达载体构建、离子交换层析、亲和层析、细胞转染,稳定表达细胞系的
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为探讨hBMP-6在骨折后的愈合治疗和原发性骨质疏松症的防治中的潜在前景,我们采用RT-PCR、cDNA克隆、质粒表达载体构建、离子交换层析、亲和层析、细胞转染,稳定表达细胞系的克隆、Western Blot、半定量RT-PCR和碱性磷酸酶活性分析等生物学技术与方法,在原核系统表达rhBMP-6和GST-hBMP6融合蛋白,并对其进行纯化和体外诱骨活性检测;同时,建立表达hBMP-6的稳定细胞系C3H10T1/2(△hBMP-6),分析内源性表达hBMP-6对C3H10T1/2细胞分化的影响;还利用Mercury Pathway Profiling Systems系统对hBMP-6的信号传导途径进行了初步的探讨.我们从原核表达系统获得的高纯度rhBMP-6和GST-hBMP6蛋白具有诱导多功能性前体细胞向成骨细胞分化的作用,也证明内源性表达的hBMP-6具有以上作用,为进一步体内诱导异位成骨试验和研发辅助性治疗骨质疏松性骨折,特别是绝经期后妇女的骨质疏松性骨折的基因工程药物及hBMP-6基因治疗提供前期基础.同时,初步筛选了hBMP-6可能参与的三个信号传导途径,为进一步阐明BMP-6作用机理作了有益的探讨.
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