论文部分内容阅读
山羊绒具有重要的经济价值,其细度是评价山羊绒品质的重要性状,提高绒产量和细度一直是研究的热点。次级毛囊是产生绒的重要器官,其调控因子影响绒的生长。次级毛囊和产生毛的初级毛囊的不同点是初级毛囊有皮脂腺,而次级毛囊没有皮脂腺,两者在胚胎发育时间不同等。毛囊中视黄酸发挥作用,而视黄酸结合蛋白Ⅰ(CRABPⅠ)通过调控视黄酸的浓度,进一步调控视黄醛的作用,来调控皮脂腺的发育。本研究以内蒙古绒山羊不同胎儿日龄皮肤为研究对象,采用DDRT-PCR技术筛选控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的基因。本研究还克隆视黄酸结合蛋白Ⅰ(CRABPⅠ)和甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRIP12)基因的cDNA序列,进行生物信息学分析,运用实时荧光定量PCR检测其在皮脂腺发育的胎儿日龄即90d-130d皮肤中的表达变化情况,主要的研究结果如下:
1.采用DDRT-PCR技术在不同胎儿日龄的绒山羊皮肤中筛选到了15条阳性差异片段。运用实时荧光定量PCR检测发现有3条在50d-80d表达差异显著,都为未知基因,可能与初次级毛囊的发育有关。有5条在90d-130d表达差异显著,可能参与调控次级毛囊和皮脂腺的发育,其中有1条与牛的甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRIP12)基因有较高的同源性。
2.首次克隆了绒山羊的CRABPⅠ和TRIP12基因的cDNA序列。克隆获得的CRABPⅠ的cDNA序列长度为679bp,含有4个外显子,编码137个氨基酸,分子量为15.6 KDa,等电点pI=5.30。获得的TRIP12的cDNA序列长6413bp,含有40个外显子,编码1239个氨基酸,分子量是134.2KDa,等电点pI=9.42。
3.氨基酸序列分析表明,绒山羊的CRABPⅠ蛋白是一种游离蛋白,不存在跨膜区和信号肽,含有两个疏水区域。其二级结构中α螺旋占39.1％,β片层占34.1％,转角(Turn)占14.5％,无规则卷曲(Coil)占12.3％。绒山羊的TRIP12蛋白没有信号肽,存在跨膜区和23个疏水区、5个N-糖基化位点和9个O-糖基化位点。其二级结构中α螺旋占56.3％,β片层占5.89％,Turn占17.4％,Coil占20.9％。比对分析表明,绒山羊CRABPⅠ与牛的氨基酸序列相似性最高达98.6％,TRIP12与牛的氨基酸序列相似性最高达96％。
4.实时荧光定量PCR结果表明CRABPⅠ基因在所检测的90d-130d的胎儿皮肤中都有表达,在90d的表达量最高,而在100d、120d、130d的表达量明显低于90d(P<0.05),仅为90d的1/25左右。TRIP12基因在120d、130d的表达量高于90d和100d,但差异不显著。
以上筛选到的15条差异片段将为进一步研究初级毛囊和次级毛囊的分化提供基础。通过实验预测了CRABPⅠ和TRIP12两基因的作用及蛋白结构,将为揭示绒山羊毛与绒的发育奠定一定的分子基础,为绒山羊的育种业提供基础。