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流感病毒(influenzavirus)具有高度的传染性，并能引起急性呼吸道疾病，它的流行特点是在短期内突然发生，迅速蔓延，能造成不同程度的流行，包括世界大流行、局部流行及散发，发病率高并伴有一定的病死率。流感是一种目前人类尚不能有效控制的世界性传染病，接种流感疫苗是预防流感病毒传播的主要手段，目前主要使用鸡胚为基质生产的流感疫苗。反向遗传学在研究流感病毒方面的突破性进展，使得利用哺乳动物细胞为基质生产流感疫苗愈趋成熟。同时，流感也是国际上第一个实现全球监测的传染病，所以能够在适宜的培养条件和敏感细胞培养下有效地分离和鉴定流感病毒成为流感病毒的监测和临床快速诊断的基础。此外，本论文还对流感病毒耐受超高压力方面进行研究。
一、流感病毒在不同细胞中适宜培养条件及分离的研究本实验采用MEK细胞、FRhK-4细胞、MDCK细胞和Vero细胞分别接种甲型流感病毒H1N1型、H3N2型和乙型流感病毒，观察三种毒株在不同培养条件下的细胞病变(CPE)、血凝滴度。FRhK-4细胞和MDCK细胞对流感病毒较敏感。接种流感病毒最适培养条件是采用浓度为1.4‰～2.8‰的NaHCO3及浓度为1.0μg/ml的TPCK-胰酶浓度的病毒维持液；并选用胞龄48h的细胞；根据得到的适宜培养条件和敏感细胞分离临床样本，在10个临床样本中成功分离得到两个阳性流感病毒野毒株，并将这两份样本病毒分别定型为甲型流感病毒H1N1和H3N2。本试验结果为培养和分离流感病毒奠定基础。
二、甲型流感病毒(H3N2)在Vero细胞上适应性研究流感病毒野毒株A/kunming/1/2005(H3N2)于33℃在Vero细胞上连续传代25次，获得血凝滴度为1024的Vero细胞初步适应的毒株A/kunming/1/2005va。采用血凝试验、血凝抑制试验及RT-PCR方法进行鉴定。同时成功地构建真核表达载体PIVV2，为用反向遗传学获得Vero细胞适应的流感病毒打下良好基础。
三、超高压力对流感病毒生物学活性的影响本试验研究了超高压力对流感病毒生物学活性的影响。通过血凝试验，鸡胚、MDCK细胞和FRhK-4细胞感染性试验、RT-PCR等方法检测不同压力处理后流感病毒的灭活情况。结果表明，在250Mpa压力下处理一小时流感病毒感染力下降了4～5log10TCID50/ml，血凝效价变化不大；在350MPa的压力以上，病毒感染性完全消失，血凝效价也明显降低；而在400MPa压力下仍可扩增出流感病毒八个基因节段的产物。