IP6+Ins对人卵巢癌SKVO3细胞株VEGF、IGF-1的表达及其侵袭能力影响的研究

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卵巢癌(OC)是常见的妇科恶性肿瘤之一,但因其恶性度高,常伴盆腹腔内广泛播散、转移,死亡率居妇科恶性肿瘤首位,5年生存率仅约为30%[1]。尽管大多数卵巢癌患者最初受益于满意的肿瘤细胞减灭术(CRS)联合以铂类为基础的化疗,但近90%的患者仍然会经历复发[2],产生耐药,并最终死亡。与大多数恶性实体肿瘤一样,瘤体中富含新生血管促进卵巢癌的生长、侵袭转移,预后一般很差[3]。VEGF(血管内皮生长因子)及IGF-1(胰岛素样生长因子-1)在包括卵巢癌在内的多种类型肿瘤中均过度表达,两者均能够促进新生血管的形成,与卵巢癌的侵袭转移密不可分[4]。虽然针对VEGF及IGF-1的靶向药物已在临床应用,但是不仅价格高昂、还会产生许多副作用而且临床疗效不太理想。面临如此严峻的形式,寻找一种天然、无毒副作用的治疗方法来提高卵巢癌的临床疗效就显得尤为重要了。  IP6又称肌醇六磷酸或植酸,其安全无毒,几乎存在于所有哺乳动物及植物体内[5]。IP6具有广泛的防癌及抗癌作用,能够抑制多种肿瘤的生长、侵袭,且呈剂量依赖性。此外,IP6与其他药物联合应用可以增强抗癌效果,同时减少抗癌药物的副作用。Ins即肌醇,也具有中度的抗肿瘤活性,IP6+Ins联合应用具有协同作用,抗癌效果明显优于单独使用任意一种[6]。  目的:本文旨在观察低、中、高不同剂量的IP6+Ins及中剂量IP6+Ins与顺铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞株VEGF及IGF-1表达的作用及对卵巢癌细胞侵袭能力的影响,希望能够为卵巢癌的治疗提供新的思路。  方法:  1. 细胞培养:使用常规细胞培养技术来培养人卵巢癌SKVO3细胞。  2. 实验分组:本实验共分六个组,依次为a、b、c、d、e、f,其中a为空白对照组、b为IP6+Ins低剂量组(1.5 mmol/L)、c为IP6+Ins中剂量组(3mmol/L)、d为IP6+Ins高剂量组(6mmol/L)、e为顺铂组(3ug/ml)、f为联合用药组: 顺铂+(IP6+Ins)中剂量组(3ug/ml+3mmol/L)。  3. Transwell肿瘤细胞侵袭实验用于观察不同浓度的IP6+Ins,顺铂及其两者联合使用对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响。  4. RT-PCR实验方法检测经顺铂、不同浓度IP6+Ins及联合用药分别处理后对人卵巢癌SKOV3细胞中VEGFmRNA及IGF-1mRNA表达情况的影响。  5. Western blot实验技术检测各组人卵巢癌SKOV3细胞中IGF-1蛋白的表达变化。  6. 统计方法:  该实验采用SPSS22.0统计学软件处理并分析实验数据,以P<0.05表示差异有统计学意义。  结果:  1. Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测经各组药物作用后,人卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的变化,结果显示:a、b、c、d、e、f各组细胞数,以?(x)±S表示,分别为:77.67±4.16、65.00±3.61、50.33±4.51、39.00±3.00、24.33±3.06、16.67±1.53;各用药组较对照组相比,细胞数均减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,不同浓度IP6+Ins组之间的细胞数排序为:b组>c组>d组,且两两比较后差异均具有统计学意义(P<0.05)。另外,IP6+Ins中剂量组、顺铂组、联合用药组之间,细胞数的排序为:c组>e组>f组,两两比较后差异均有统计学意义(P<0.05)。  2. RT-PCR实验检测人卵巢癌SKOV3细胞中VEGFmRNA的表达情况:各组中均有VEGFmRNA表达,对照组中高表达,处理组中低表达;在所有分组中,VEGFmRNA的表达量依次为:a组>b组>c组>d组>e组>f组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。  3. 各组中IGF-1mRNA均有表达,a、b、c、d四组中IGF-1mRNA表达量分别为:1.000±0.000、0.8900±0.0139、0.8014±0.0307、0.7187±0.0179,随着IP6+Ins浓度的增加,IGF-1mRNA表达量逐渐减少;c、e、f三组IGF-1mRNA表达量依次为:0.8014±0.0307、0.5960±0.0254、0.4985±0.156,即c组>e组>f组。各组之间两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。  4. Western blot实验方法检测各组人卵巢癌SKOV3细胞中均有IGF-1蛋白的表达。对照组中表达量最高,所有分组中,IGF-1表达量自高至低依次为:a组>b组>c 组>d组>e组>f组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。  结论:  1. IP6+Ins能够降低人卵巢癌SKOV3细胞中VEGFmRNA的表达。  2. IP6+Ins能够降低人卵巢癌SKOV3细胞中IGF-1mRNA及IGF-1蛋白的表达。  3. IP6+Ins能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力,且呈现出剂量依赖性。IP6+Ins可能是通过降调节VEGF及IGF-1的表达来抑制其侵袭能力。  4. IP6+Ins与顺铂联合用药具有协同作用,IP6+Ins可能通过降低IGF-1mRNA及IGF-1蛋白的表达,增强顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用。
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