【摘 要】
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抗血管生成治疗(antiangiogenesis therapy)是目前肿瘤治疗研究中的一个热点.vasostatin是Sandra E.Pike等于1998年发现的一种新的血管生成抑制剂.该研究首先以成人肝脏cDNA
【出 处】
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中国药品生物制品检定所 中国食品药品检定研究院
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抗血管生成治疗(antiangiogenesis therapy)是目前肿瘤治疗研究中的一个热点.vasostatin是Sandra E.Pike等于1998年发现的一种新的血管生成抑制剂.该研究首先以成人肝脏cDNA文库为模板,用PCR的方法扩增得到vasostatin基因片段,与载体pUC19连接后得到重组克隆质粒pUC19/VASO,并通过DNA测序,证实其核苷酸序列与文献所载完全一致.vasostatin基因与非融合型表达载体pLY-4相连接构建重组表达质粒pLY-4/VASO,经30℃培养、42℃诱导未能表达出目的蛋白.将vasostatin基因分别与融合型表达载体pQE-30、pGEX-20T、pThioHisA相连接构建重组表达质粒pQE-30/VASO、pGEX-20T/VASO、pThioHisA/VASO,经IPTG诱导均明显表达出相应的融合蛋白,其中pQE-30/VASO的重组蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白量的50﹪以上.包涵体经洗涤后用含8M尿素的溶液进行溶解,在变性条件下用以Ni-NTA为基质的固定金属螯合亲和层析(IMAC)法进行纯化,纯化后蛋白的纯度达95﹪以上.将此纯化的变性蛋白用稀释、透析及柱上复性的方法进行复性,其中用梯度透析的方法可得到82.8﹪的可溶性蛋白.纯化、复性后的重组蛋白测定了N-端氨基酸序列、分子量、等电点等理化指标,结果与理论值相符.通过在本室建立了内皮细胞增殖试验、内皮细胞迁移试验以及鸡胚尿囊膜血管生成试验的方法,我们对vasostatin的生物学活性进行了研究,结果表明它能抑制内皮细胞的增殖和迁移以及抑制鸡胚尿囊膜的血管生成.
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