新生24hSD乳鼠海马神经干细胞体外培养及诱导分化

• 作 者: 李红平
• 机 构: 贵阳医学院
• 出 处: 贵阳医学院
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 海马神经干细胞 免疫荧光化学 体外培养 诱导分化

目的：建立新生24h内SD乳鼠海马源性神经干细胞的体外培养方法，探讨含或不含细胞因子的血清培养基诱导海马神经干细胞分化的情况。　　方法：（1）海马神经干细胞(hNSCs)分离、培养与鉴定；（2）①hNSCs的诱导分化并检测神经细胞特有的抗原标志物检测：分别检测NSE/NF-200，GFAP，Galc的表达。②将hNSCs分为三组，按不同培养液诱导分化，三组均在同一条件下培养，3天后同时收集各组细胞的分化率，并测量各组分化的神经细胞胞体大小，以探索不同培养条件下对神经细胞生长的影响。③电镜下观察hNSCs及诱导分化后的神经细胞。（3）流式检测hNSCs细胞周期。　　结果：（1）原代及传代的神经球nestin免疫荧光呈阳性表达。（2）①诱导分化后的神经细胞NSE/NF-200、GFAP、Galc免疫荧光均成呈阳性表达。②不同条件下培养3天后hNSCs的分化率，分别为对照组：（5.28士2.09）％；实验组1：（87.01士5.43）%；实验组2：（83.54士6.32）%，实验1组和实验2组均能诱导hNSCs分化，其分化率比较，无统计学意义（P>0.05）。分化的神经细胞在不同培养条件下生长情况无统计学意义(P>0.05)。③电镜下可观察到hNSCs、神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的微细结构。（3）hNSCs细胞周期显示细胞周期完整。　　结论：1.体外成功分离、培养并鉴定新生24h内SD乳鼠海马神经干细胞。2.含或不含细胞因子（EGF、 bFGF）的血清培养基均能诱导hNSCs的分化。3.电镜下观察到hNSCs及诱导后神经细胞的微细结构，说明所培养的细胞为海马神经干细胞。