【摘 要】
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目的：构建肌肉特异性酪氨酸激酶(muscle specific receptor tyrosine kinase MuSK)细胞外区肽段与红色荧光蛋白(mCherry)的重组融合蛋白基因,为下一步哺乳类细胞表达融合蛋白,
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目的：构建肌肉特异性酪氨酸激酶(muscle specific receptor tyrosine kinase MuSK)细胞外区肽段与红色荧光蛋白(mCherry)的重组融合蛋白基因,为下一步哺乳类细胞表达融合蛋白,并作为抗原在荧光免疫实验中,用于乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)阴性的重症肌无力(myasthenia gravis MG)患者血清中的肌肉特异性酪氨酸激酶抗体(MuSKAb)的检测奠定基础。方法：应用PCR技术,从含有mCherry基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因,加A反应后克隆至T (pGEM-T Easy Vector)载体,以限制性内切酶Age Ⅰ酶切电泳鉴定后,再克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸(共431个氨基酸)肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His (MuSK),构建肌肉特异性酪氨酸激酶-红色荧光蛋白(MuSK-mCherry)融合荧光蛋白基因。将连接产物转化E coli DH5a,经菌落PCR鉴定正确后,分离纯化,进一步用BsrG I酶切,琼脂糖凝胶电泳检测,并经测序鉴定重组融合蛋白基因的正确性。结果：构建的重组基因载体pMT/BiP/V5-His (MuSK-mCherry)酶切电泳检测,发现了与理论设计值相符的融合蛋白基因。测序结果显示融合蛋白基因序列正确,并正确插入在表达载体的基因可读框内。结论：成功地构建了含有重组MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因的真核表达载体,为下一步进行真核表达融合荧光蛋白奠定基础。
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