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榆耳(Gloeostereum incamatum S.Ito et Imai),是我国传统的药食兼用菌,民间利用榆耳子实体治疗肠炎、菌痢等疾病的传统由来已久。本文即以栽培榆耳子实体和榆耳发酵液为研究对象,着重对榆耳抑菌活性方面进行全面系统的测定与分析,实验选用抑菌活性较强的榆耳菌种G118和栽培榆耳子实体做为研究对象,两者均由吉林农业大学菌物中心鉴定。主要研究如下:
1.本实验对栽培榆耳子实体的提取,采用传统水煎法改良后的新方法,得到了提取较为充分的子实体水提液,从耐热、pH耐受、以及金属离子等角度,对其理化稳定性进行测定,得知,子实体水提液具有良好的热稳定性和较好的pH耐受范围,-20℃低温处理不影响抑菌活性,且经过121℃处理20min后仍具有84%以上的抑菌活性;在pH酸性至中性范围内均能保持稳定的抑菌活性;Zn2+可大幅提高水提液抑菌活性,Fe3+也有一定提升抑菌活性的效果,推测是Zn2+和Fe3+能与部分抑菌成分发生鳌合等作用所致,其它金属离子对子实体水提液抑菌活性影响不大。发酵液的理化稳定性与子实体水提液相一致。
2.本实验对榆耳菌种G118进行摇瓶培养,分别从培养基配置、装液量、接种量、培养温度、摇床转速、培养时间等多个方面研究了摇瓶发酵条件对榆耳发酵液抑菌活性的影响,得知使用pH7.0的马铃薯液体培养基、装液量50mL/250mL、接种量15%、培养温度28℃、转速160r/min、培养9天所得发酵液抑菌活性为最佳。
3.实验采用不同极性的有机试剂萃取子实体水提液和发酵液样品,充分萃取后,测定抑菌活性得知:极性强的有机溶剂如乙酸乙酯较易萃取出抑菌有效成分,其萃余部分无抑菌能力;极性弱的溶剂如石油醚则不能完全萃取出抑菌成分,萃余部分表现出抑菌活性;而极性居于二者中间的乙醚,萃取液的抑菌能力也在二者中间。由此推测,抑菌活性成分主要为极性分子。此外,实验采用多种脱蛋白、脱多糖以及脱脂试剂处理子实体及发酵液样品,测定各处理样品的抑菌能力,发现除多糖和脱蛋白样品均表现出较好的抑菌活性,相应的多糖成分则无抑菌能力,这于以前有些报道榆耳多糖具有抑菌活性的结果不同;另外,酶法除蛋白的样品较sevage法除蛋白样品的抑菌能力强,可知有机溶剂处理会损失部分脂溶性抑菌成分。脱多糖脱蛋白脱脂的子实体水提液和发酵液均表现出良好的抑菌活性,由此可知,抑菌活性成分为极性小分子混合物。
4.通过抑菌比较实验得知,发酵液抑菌活性明显高于子实体水提液。子实体水提液的抑菌活性相当于100u/mL的红霉素溶液和40u/mL的氯霉素溶液;发酵粗提液的抑菌活性相当于400 u/mL的红霉素溶液和300u/mL的氯霉素溶液;且二者的抑菌活性分别相当于1.5%和2.0%的苯甲酸钠溶液(pH=4)。此结论有助于更加科学合理的开发利用榆耳这一珍贵药用真菌资源。