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副猪嗜血杆菌病又称为革拉瑟氏病(Glassers disease)，是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)引起的一种严重的全身性疾病，以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。近年来，全国各地都有关于HPS感染甚至是流行的报道，并且发病严重，死亡率高，造成巨大的经济损失。鉴于此，对地方菌株进行分离鉴定和相关快速诊断方法的建立，显得十分必要。本试验首先从华南地区部分省市送检的疑似患多发性浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到l2株疑似细菌，进行了细菌形态观察、培养特性和生化鉴定；根据HPS16S rRNA序列设计引物进行PCR扩增，得到预期的822bp目的片段并进行克隆测序，通过NCBI BLAST SERVER(version2.0)进行联机检索分析，最终证实为HPS。通过对16S rRNA核苷酸序列的相似性分析，表明各分离株之间同源性较高，相似性达98.3％～99.9％；与国外分离株相似性达97.4％~100％。
本研究对分离株的生物学特性进行研究。对不同血清浓度和NAD浓度的TSB液体培养基的比较，发现血清浓度为8％，NAD浓度为100μg/mL为HPS最适培养条件。HPS在TSB液体培养基中的生长曲线显示培养16-20h达到活菌数高峰，且振荡培养条件下无明显的平台期。药敏试验表明各分离株均有不同程度的耐药表现，耐药状况与各地区用药状况密切相关，越是大剂量滥用抗生素的地区耐药情况越严重；菌株对生产上常用药物如苯唑青霉素、氧哌嗪青霉素、复方新诺明、阿米卡星、链霉素和青霉素G已严重耐药；菌株间对药物的敏感性差异很大，但实验数据表明大部分菌株对头孢菌素类敏感性较高。利用ERIC-PCR对12株HPS分离株进行指纹图谱分析，结果表明12株分离株产生了7种不同的ERIC-PCR DNA指纹图，部分分离株具有相同的ERIC-PCR DNA指纹图，且不同的指纹图之间具有部分相同大小的条带。
试验采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的HPS检测方法。针对HPS16S rRNA基因保守区域设计6条引物，在Bst大片段聚合酶的作用下，对模板DNA进行棉状等温扩增，并且优化LAMP的反应体系、检验其灵敏性与特异性。结果表明：该方法对HPS的最小检测限为0.2pg/μL，灵敏性高于常规PCR方法103倍；完成反应仅需65 min，操作方便，适合对临床疾病进行快速诊断。LAMP检测方法与常规PCR检测方法比较，对于临床样品的检出率分别为91％和85％，前者高于后者，表明LAMP敏感性更高。
本试验将HPS血清型4、5型分离菌株经超声波破碎处理后的产物致敏醛化鞣酸化红细胞，建立了检测HPS抗体的间接血凝试验方法。试验结果表明，绵羊红细胞最适处理条件为4℃醛化8小时，血清型4型最适抗原致敏浓度为0.56mg/mL，而血清型55型最适抗原致敏浓度为0.58mg/mL，最佳致敏时间为30min。用猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪大肠杆菌、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪口蹄疫病毒和猪伪狂犬病毒等阳性血清按已建立的IHA进行操作，呈阴性反应，初步表明建立的IHA具有较高的特异性，可用于临床血清的检测。用已建立的IHA检测广东部分猪场采集的350血清份样品，检出75份阳性血清，阳性率为21.4％。结果表明广东部分猪场感染了HPS。
本研究对分离株进行分离鉴定和生物学特性的研究，为华南地区HPS的病原学检测进行补充，为进一步研究该菌的流行病学、临床诊断、血清学等提供依据。针对16SrRNA建立的LAMP方法灵敏度高、特异性强，能够作为HPS的快速诊断方法，对于基层和实验室应用均具有良好前景。利用间接血凝方法建立的HPS抗体检测方法特异性强、敏感性好、结果稳定，可广泛应用于临床样品的快速检测，为生产上检测HPS抗体提供了方便的途径。