PA1b的纯化鉴定及功能研究

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豌豆白蛋白1b (pea albumin 1b,PA1b)为含37个氨基酸的单链肽,分子量为3,742Da,第3、7、15、20、22和32位的氨基酸均为半胱氨酸,由3对二硫键构成胱氨酸结模体。该肽在植物体内参与生长和代谢的调节,其作用模式与动物体内胰岛素和胰岛素样生长因子作用类似。它在大豆种子中可结合7S Bg蛋白,7S Bg蛋白又可以结合动物胰岛素和胰岛素样生长因子,故PA1b又名为豆类胰岛素Leginsulin。NMR研究显示,豆类胰岛素与胰岛素,Bg蛋白与胰岛素受体在空间结构上有相似之处。那么PA1b是否具有胰岛素样调节糖代谢功能?引起了我们进一步研究的兴趣。特别的是,这个植物多肽同时在动物胃肠道内被发现存在,它是否是新的类似肠促胰岛素多肽激素,同样也是令我们感兴趣的问题。 本研究以豌豆种子为原材料,分离纯化得到PA1b及其多种异构体,并通过质谱和氨基酸测序进行了鉴定。同时建立了大规模制备PA1b方法。体外酶学实验证明,PA1b及其在豌豆种子的各种异体形式都抗胃蛋白酶的水解,通过二硫苏糖醇(DTT)还原PA1b分子内二硫键,直接证明这与它在高级结构上具有胱氨酸结模体的结构域有关。用正常昆明小白鼠为模型,通过皮下及静脉注射研究了PA1b对血糖浓度的调节,发现了PA1b对血糖调节的规律并提出了可能的解释,为PA1b的深入研究与应用提供了线索与依据。
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