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实验室前期工作发现,用浓度逐渐增高的氨甲蝶呤(methotraxate,MTX)对NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞进行体外诱导,可获得具有不同抗性水平的MTX抗性细胞群体,同时出现与MTX浓度成正比增加的双微体(double minutechromosomes,DMs)。应用染色体显微切割/DOP-PCR技术分离MTX抗性NIH3T3细胞系中的DMs,经array-CGH及测序分析结果表明DMs中含有与mVL30反转录转座因子同源的序列。
为了研究mVL30反转录转座因子与MTX抗性和DMs的关系,本研究以小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3、MTX100-400(可耐受100~400μmol/L MTX)为研究对象,利用差异PCR(D-PCR)、RT-PCR、Real time PCR等方法对mVL30反转录转座因子DNA和RNA水平进行了研究。结果发现,小鼠MTX耐药细胞中mVL30因子的DNA和mRNA水平均明显低于正常NIH3T3细胞,但不同浓度耐药细胞之间的差异没有统计学意义。
以上结果提示MTX抗性可使细胞中mVL30因子的表达降低,初步认为DMs上并不包含完整的mVL30因子,但mVL30因子与DMs之间的关系以及mVL30因子与MTX耐药的具体机制还有待于进一步研究。