论文部分内容阅读
本文根据已知硬骨鱼细胞色素P450芳香化酶CYP19基因序列设计两套嵌套简并引物，用巢式PCR扩增并克隆出了两种泥鳅的CYP19a和CYP19b的DNA片段。其中，泥鳅CYP19a片段和大鳞副泥鳅CYP19a片段分别长941bp和935bp；泥鳅CYP19b片段和大鳞副泥鳅CYP19b片段分别长1337bp和1473bp。所得序列输入Genbank进行同源性检索，其最高同源性分别对应于DrCYP19a(88.1％)、DrCYP19a(88.1％)、OnCYP19b(73.1％)、OnCYP19b(74.5％)，依据CYP19基因的命名规则，将其分别命名为MaCYP19a、PdCYP19a、MaCYP19b、PdCYP19b。在此基础上用各自的特异引物克隆出两种泥鳅CYP19的相应cDNA片段。通过基因组DNA和cDNA序列的比较证明两种泥鳅的CYP19a基因均包含2个内含子和3个外显子，编码的蛋白质序列长84氨基酸残基；而两种泥鳅的CYP19b基因均包含三个内含子和四个外显子，编码的蛋白质序列长145氨基酸残基。
以GAPDH基因为参照，分别对2种泥鳅成体组织和不同发育阶段的胚胎进行了CYP19a和CYP19b基因的半定量RT-PCR表达分析。结果表明，CYP19a在两种泥鳅成体组织中具有大致相似的表达模式，在卵巢和脑组织中表达量较大，在精巢和肝组织中微量表达；在胚胎中二者的表达模式差异较大，泥鳅CYP19a在原肠期表达量最高，其次是神经胚、尾芽期，大鳞副泥鳅CYP19a在卵黄吸收期表达量最高，其次是原肠期、神经胚。而CYP19b基因在两种泥鳅中的表达模式差异较大，如：泥鳅CYP19b基因只在成体泥鳅卵巢、肾以及胚胎的原肠胚和神经胚中表达。大鳞副泥鳅CYP19b基因在成体的脑、卵巢和肾以及胚胎期的神经胚和卵黄吸收期表达。这些结果为揭示细胞色素P450芳香化酶基因与环境性别决定机制的关系奠定了基础。