论文部分内容阅读
暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)属鲀形目、鲀科、东方鲀属，近海暖温水性底层鱼类,有海淡水生殖洄游习性，主要分布在中国的东海、黄海和渤海区域，是一种经济和营养价值很高的水产品。然而近些年来，由于暗纹东方鲀原先的生活、生态环境逐渐恶化、长江水文条件逐年改变以及人为的过度捕捞等原因，导致了野生暗纹东方鲀资源枯竭现象日益严重，间接导致养殖产量锐减、经济效益下降。因此，暗纹东方鲀的遗传改良、种质保护等工作迫在眉睫。本论文研究主要采用微卫星技术对上海、广州、江苏三个养殖区域的暗纹东方鲀群体进行遗传多样性研究，并且对与生长性状相关的微卫星标记进行筛选，不仅了解目前养殖的暗纹东方鲀种质资源情况，而且对今后的良种培育、遗传改良、种质提升、产量增高等提供了一定的科学理论依据。本文首先阐述了鱼类遗传育种的技术及其当前的发展动态，分析了现代生物技术在鱼类育种中的应用概况，探讨了鱼类遗传育种的发展趋势，旨在为鱼类新品种选育提供理论依据与参考；并明确了建立先进的鱼类育种技术体系和育种研究创新平台、提高鱼类遗传育种的效果和苗种质量对促进水产养殖业的健康发展具有重要的意义。其次，通过对有关资料的归纳研究，对暗纹东方鲀的基础生物学、繁殖生物学、人工养殖技术、生态、毒素等领域的研究现状进行综述。通过概述能够清楚的看到暗纹东方鲀的研究现状，结合研究技术和成果，可以更好的探究今后的研究重点和研究方向，有利于填补暗纹东方鲀的研究空白和深化科研研究价值。为了给养殖暗纹东方鲀分子辅助育种和遗传改良提供理论的基础，本研究基于微卫星标记分析技术，采用21对微卫星引物对广州(GZ)、江苏(JS)和上海(SH)三个养殖群体的暗纹东方鲀遗传多样性进行研究分析，结果可以成功扩增出具有一定多态性片段的微卫星位点共有19个。19个位点分析共得到125个等位基因，每个位点等位基因数范围从3到11，平均值是6.58，有效等位基因范围从1.7到7.8，平均值是4.5，平均观测杂合度范围从0.1556到1.0000，平均期望杂合度范围从0.3993到0.8759，平均多态信息含量（PIC）范围从0.3533到0.8577。三群体的平均多态信息含量（PIC）由小到大依次为GZ、SH、JS群体。三群体间遗传分化指数分别为0.0481、0.0617、0.0755，平均值为0.0808，可见发生遗传分化程度较小。GZ和JS群体间的遗传距离最近（0.2039），GZ和SH群体间的遗传距离最远（0.3508）。用UPGMA法进行聚类分析，GZ群体和JS群体聚为一类，SH为一类。分析表明结果不仅基本符合三个养殖群体的养殖环境，也反映出各群体的遗传多样性比较丰富，并具有一定程度的遗传分化。另外，本文为了筛选与暗纹东方鲀生长相关的微卫星分子标记，采用SSR结合BSA技术对于同龄孵化群体的同池养殖暗纹东方鲀生长性状相关微卫星标记的筛选。利用85对微卫星引物对暗纹东方鲀生长快、慢两个基因池进行分析，共筛选到14对微卫星具有差异片段。然后分析这14个差异微卫星位点在两个基因池的暗纹东方鲀个体的差异条带，结果表明：位点TOP03、TOG01、fms15、fms75的生长慢组特有条带的出现率分别达到：63.33%、53.33%、33.33%和43.33%，相关系数(r)分别为：-0.553、-0.346、-0.333和-0.423，与生长性状呈现极显著负相关关系（p<0.01）；fms89生长快组特有条带的出现率为33.33%，相关系数(r)为：0.388，与生长性状呈现极显著正相关关系（p<0.05)。而验证实验结果只有位点fms15、fms75与生长性状显著相关，相关系数分别为-0.411和-0.384。经克隆测序得到了fms15的差异片段的氨基酸序列，比对结果与红鳍东方鲀同源性达到了98%，差别在于序列中有三个碱基发生置换（G-C、C-G、G-A）。说明该微卫星位点对于暗纹东方鲀生长性状有显著效应，可用于人工选育具有优良生长性状的分子标记，为开展暗纹东方鲀的分子标记辅助育种提供了有价值的遗传标记。