粒细胞集落刺激因子促进骨髓干细胞心肌细胞分化的实验研究

来源 :同济大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:binghemiao
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目的:   通过在同一标准(同一载体和同一实验条件)下依次检验1)、干细胞动员剂是否真正起到了刺激骨髓干细胞分裂增加并释放入外周血的作用;2)、动员后的骨髓干细胞是否正确的因“归巢作用”到达心肌;3)、到达心肌的经骨髓干细胞横向分化的细胞是否真正具有与心肌细胞相似的功能(即是否真正成为所谓的“心肌样细胞”)这一续贯的过程,证实应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员骨髓干细胞促使心肌细胞再生的可行性和有效性。   方法:   选取异丙基肾上腺素(ISO)造模成功的急性心肌缺血SD大鼠20只(以EF值小于60%为标准),随机分为动员组和对照组各10只,动员组每天同一时间连续7天皮下注射G-CSF,对照组同一时间皮下注射等量生理盐水。第5天两组均腹腔注射5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),并尾静脉取血后分离单个核细胞,加入抗大鼠CD34+单克隆抗体,流式细胞仪测外周血CD34+细胞占单个核细胞的比例。第28天检查超声心动图,随后处死两组大鼠,取出心脏后制成冷冻切片,以兔抗鼠一抗和荧光二抗标染切片,观察荧光显色的细胞;以抗BrdU单克隆抗体ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶法)DAB染色,观察显色阳性的细胞。EF值和CD34+细胞比例以均数±标准差((x)±s)表示,组问两两比较采用t检验,用SPSS14.0软件进行数据处理,以P<0.05为有统计学差异。   结果:   1、动员剂(或生理盐水)皮下注射7天后动员组外周血CD34+细胞占单个核细胞的比例(4.350±0.7487)%,显著高于对照组(0.330±0.2111)%,组间比较具有统计学差异(P<0.05);   2、实验第28天心动超声图检查显示动员组EF值(74.700±3.0569)%,显著高于对照组(65.900±4.0675)%,组间比较具有统计学差异(P<0.05);   3、心肌组织切片BrdU免疫荧光染色可见动员组均存在相对密集并且均匀分布的荧光显色的细胞,对照组部分切片存在零星的荧光显色的细胞;BrdU-DAB染色可见动员组显色阳性的细胞排列规整,具有方向性,可明显显示心肌细胞横纹和肌小节结构,阳性细胞间及与宿主心肌细胞间有细胞的突起相连,对照组部分切片存在零星的显色阳性的细胞。   结论:   1、粒细胞集落刺激因子能够极大的动员骨髓干细胞的增殖并排入外周血中;   2、动员后的骨髓干细胞能够正确的因“归巢作用”到达心肌;   3、受损心肌组织内经骨髓干细胞分化而成的细胞具有心肌细胞的功能,可以称为“心肌样细胞”;   4、应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员骨髓干细胞促使心肌细胞再生的可行性和有效性。
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