论文部分内容阅读
研究背景:青光眼是世界第二大致盲性眼病,是一类非常复杂的眼病或综合征群。其本质性的病理改变是视网膜神经节细胞(retinalganglion cell,RGC)的凋亡。目前所有的青光眼治疗都是针对降低眼压所进行的,但青光眼已经不再被简单地认为是单纯眼压升高而引起的视神经损伤疾病,除了降低眼压外,如何使RGC免于凋亡,有效地保护视神经,已成了青光眼治疗的重要研究方向。
Copolymer1(Copl)是美国FDA批准的一种用于治疗多发性硬化的药物,化学名glatiramer acetate,可以主动地和被动地激活T细胞介导的免疫反应,以发挥其神经保护作用。本实验通过Copl对实验性高眼压性青光眼的RGC的作用的观察以及产生该作用的相关免疫学机理的探讨,为探索该药在抗青光眼视神经损害的临床使用的可能性提供实验研究的依据。
对象与方法:1.65只成年Wistar雄性大鼠,烧灼右眼上方2支和外侧1支巩膜上静脉,建立大鼠慢性高眼压模型。左眼作为对照眼。对造模成功的大鼠,分别于造模后1天,1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周各摘除6只造模成功的大鼠双眼。在取出眼球前24小时,用Fluorogold进行RGC逆行性染色,做视网膜铺片计数RGC,观察不同时段高眼压对RGC的影响。2.制作30只大鼠双眼高眼压模型,在眼压升高的第3周,于15只模型大鼠后脚皮内注射100μg Cop1和等体积的Complete Freund’s Adjuvant(CFA)混合乳化液。另外15只模型大鼠作为对照组,皮内注射等体积的PBS和CFA的混合乳化液。1周后取出大鼠视网膜,比较两组RGC细胞数和视神经乳头淋巴细胞浸润的差别。3.所有动物均在摘除眼球的同时取出脾淋巴细胞,通过流式细胞仪比较其T细胞亚群的变化和ELISA检测T细胞分泌细胞因子的变化。
结果：1.右眼巩膜上静脉烧灼后1天、1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周造模眼平均眼压分别为42.22±1.75mmHg、37.89±2.33mmHg、36.13±1.97mmHg、33.38±2.09mmHg、32.24±2.41mmHg、30.11±2.01mmHg、30.59±2.15mmHg、27.62±1.32mmH。术后1天、1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周的成模率分别为80.00％、76.92％、74.58％、71.70％、63.83％、56.10％、42.86％、41.38％。成模率和成模眼的眼压随时间延长呈下降趋势。实验组和对照组的RGC密度在早期(巩膜上静脉烧灼术后3周内)没有显著差别。造模后第4周高眼压组RGC密度明显低于对照组,随着时间的推移差别越来越显著。2.Copl处理后1周,高眼压模型眼的视网膜铺片可见视神经大量淋巴细胞聚集。Copl处理组的RGC损失率(10.24％)低于对照组(29.00％)。3.Copl处理组CD4+CD25+Treg/CD4+比值显著高于对照组。INF-γ的分泌无显著差别,IL-10的分泌实验组高于对照组,两组Copl体外刺激淋巴细胞增殖程度相同。
结论：Copl皮内注射能减少高眼压对视网膜神经节细胞的损害,对青光眼的视神经具有保护作用。这种保护作用的发生与免疫学反应有关,可能的机理为:Copl促进特异性T淋巴细胞在视神经聚集,诱导CD4+CD25-向CD4+CD25+Treg转化,促进Th1转化为Th2,增加IL-10的分泌。