转Ofat-1基因山羊检测及转录组分析

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n-3多不饱和脂肪酸(n-3polyunsaturated fatty acids,n-3PUFAs)是人类和动物内稀缺的多不饱和脂肪酸,对人类和动物的健康,尤其是对预防和治疗癌症、心脑血管等多种疾病有重要的作用。Fat-1基因是秀丽隐杆线虫体内得到的Δ-15去饱和酶基因,可以转换亚油酸成为α-亚麻酸,进入n-3脂肪酸代谢通路。试验中,优化了Fat-1的密码子,命名新的基因序列为Ofat-1,通过睾丸注射方法,制作并生产了一批转基因山羊。PCR、脂肪酸和RNA水平检测显示,Ofat-1基因已经成功转入到山羊体内,并在山羊体内得到了表达。结果如下:1. PCR结果显示,Ofat-1基因可以在山羊体基因组中检测到,F0、F1、F2代山羊总数分别为260只,86只和51只,PCR检测结果显示阳性山羊的个数分别为28只,26只和17只,阳性率分别达到了10.77%,30.23%和33.33%。PCR结果显示转入的Ofat-1基因可以遗传给下一代。2.对F1和F2代转基因山羊和非转基因山羊的的耳组织脂肪酸进行检测,检测结果为:阳性山羊n-6/n-3PUFAs平均值为2.07,阴性山羊n-6/n-3PUFAs平均值为2.81。检测结果显示转基因山羊的n-6/n-3PUFAs小于非转基因山羊,表明Ofat-1基因在山羊体内得到表达,发挥了脂肪酸去饱和作用,转化n-6PUFAs成为n-3PUFAs。3.对山羊的体重、体尺等数据进行测量,分析转基因对山羊的生长性能的影响。结果显示,转基因对山羊的体重、体长、体高、胸围、尻宽的影响不显著(P>0.05),表明转入基因对山羊正常的生长状况无明显影响。4.提取阳性山羊耳样RNA并反转录,以得到的cDNA为模板对目的基因进行进行PCR检测并测序,结果显示,部分转基因山羊的cDNA中可以扩增出目的基因片段。说明转入的基因可以在山羊体内转录生成相应的mRNA。5.转录组测序结果显示,阳性山羊转录本中发现转入基因的序列,再次表明外源Ofat-1基因可以在山羊体内转录生成mRNA。差异表达基因主要参与生理调控、代谢过程、反射活动等生物学过程。以上结果显示:转基因山羊体内的Ofat-1基因,可以遗传给下一代,并可以在山羊的体内成功表达和翻译产生去饱和酶,转化脂肪酸生成n-3多不饱和脂肪酸。Ofat-1转基因山羊的研究,为n-3PUFAs的来源提供了新的方向,即可以通过转基因动物提供人体缺少的DHA和EPA等n-3多不饱和脂肪酸,对未来n-3PUFAs的保健产品结构有重要影响。
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