论文部分内容阅读
目的:探讨高盐激活上皮细胞钠通道(epithelial sodium channel，ENaC)的分子机制，以及内源性气体信号分子H2S对抗高盐诱导ENaC异常激活的保护作用和分子机制。 方法:应用Snapwell培养非洲爪蟾肾皮质集合管上皮(A6)细胞10-14天，直至A6细胞产生极性后用于实验。(1)应用膜片钳技术检测H2S是否能抑制高盐引起的ENaC活性增强，探究PTEN(phosphatase and tensin homologdeleted on chromosome ten)特异性抑制剂BPV对ENaC活性的影响。(2)应用MTT实验检测不同浓度的NaHS(0.05mM，0.1mM，0.3mM)对A6细胞活力的影响。(3) A6细胞经过高盐，H2O2和H2S处理后，应用激光共聚焦显微镜技术，观察H2S是否能抑制高盐和H2O2引起的细胞内ROS水平升高。(4)应用Western bolt技术检测外源性H2O2和H2S对PTEN蛋白表达的影响。(5)用转染了带有绿色荧光的PI(3，4，5)P3指示质粒的A6细胞，检测高盐处理对细胞顶膜PI(3，4，5)P3水平的影响。 结果:H2S能抑制高盐引起的ENaC活性增强，H2S能逆转高盐和H2O2引起的细胞内ROS水平的升高，本实验中所应用的不同浓度的NaHS(0.05mM，0.1mM,0.3mM)均不影响A6细胞活力，抑制PTEN导致ENaC活性增加，H2S能抑制H2O2引起的PTEN的失活，高盐诱导PI(3，4，5)P3在A6细胞顶膜蓄积。 结论:H2S可以通过纠正高盐引起的ROS水平升高，抑制ROS引起的PTEN的失活，使PI(3，4，5)P3在细胞顶膜的蓄积显著减少，从而使ENaC的活性显著降低。