论文部分内容阅读
本论文根据已知的人和小鼠Integrin αVβ3基因cDNA序列的保守区域设计了四对引物,扩增得到了Intern αV亚基的部分外显子5、外显子6~29和部分外显子30,长度为2508 bp,编码835个氨基酸;Integrin β3亚基的外显子3、外显子4~8和大部分外显子9,以及外显子15的中间部分,长度分别为1035 bp和1059 bp,编码344个氨基酸。序列比对发现,两个亚基的cDNA和氨基酸序列都与人和小鼠对应序列有较高的同源性。
通过RT-PCR和免疫组化方法对母猪妊娠第12、18和25天Integrin αV和β3亚基在子宫内膜中的mRNA和蛋白表达研究发现,胚胎附植的不同阶段Intern αV和β3亚基在子宫内膜中的表达都存在明显差异,mRNA与蛋白表达的趋势一致,都是在胚胎附植中期(妊娠第18天)的表达量最高。说明其在母猪妊娠早期,即胚胎的黏附和附植过程中有重要作用。免疫组化结果显示:Integrin αV在子宫内膜腺体上皮、腔上皮、间质细胞、基质细胞和血管内皮细胞等细胞上都有免疫阳性反应,在胚胎着床的不同时期具有明显变化,妊娠第18天表达较强。Integrin β3的免疫阳性反应与IntegrinαV基本一致,但是,不如Integrin αV的表达变化明显。实验还发现Integrin αV和β3在位于子宫内膜腔上皮下面的基质中有较强的表达,同样在妊娠第18天表达最强。说明猪的子宫内膜基质具有类蜕膜化的反应,只是与人和其他哺乳动物相比,其蜕膜化的程度相对较弱而已。
对受精配种后母猪血液FSH、LH、E<,2>和P<,4>水平检测发现,相对于未妊娠时期,在妊娠前25天内FSH和LH的水平都有所下降,但妊娠第12~25天内变化不显著(p>0.05)。在妊娠第12~25天期间P<,4>的水平变化也不是很大,然而,E<,2>的水平以及E2:P4的比值却明显增加。子宫内膜中Integrin αV和β3 mRNA的表达与血液中LH、FSH、E<,2>和P<,4>的水平都呈现负相关,但相关性都不显著性(p>0.05)。表明,Intern αV和β3的表达不受生殖激素影响,或影响很小。
利用PCR-SSCP方法对Integrin β3、LIF和IL-1β基因多态性与大白猪产仔数之间的关系进行了研究,结果发现Integrin β3对产仔数影响不显著(p>0.05)。对LIF基因研究表明,三胎以上LJF1位点优势等位基因对TNB和NBA的加性效应分别为0.28和0.32;而LIF2位点优势基因的加性效应分别为0.29和0.11。两个位点合并分析结果表明,在三胎以上或所有胎次,合并基因型AAAA、ABBB 和BBBB 的TNB 和NBA 都显著高于 AAAB、AABB 和 ABAB 基因型。其中,AAAA基因型母猪的所有胎次的TNB和NBA都要比AAAB型母猪分别高1.76(p<0.001)和1.44头(p<0.01)。总之,LIF基因对母猪的产仔数有显著影响。对IL-1β基因研究发现,分别在310 bp和347 bp处各发现一个突变位点,其中310 bp处的突变对产仔数的影响较大。其AB基因型个体的第2胎和第3~8胎的NBA均显著高于BB型个体(p<0.05)。对310 bp和347 bp两个位点合并分析发现,ABCC的TNB显著高于其他三种(ABDD、BBCC、BBDD)合并基因型(p<0.05)。