论文部分内容阅读
背景与目的:Ezrin属于ERM(Ezrin-Radixin-Moesin)家族成员之一,其编码基因为villin2,定位于染色体6q25-q26,ERM蛋白的C末端与细胞骨架的actin相连,N末端通过与细胞表面的粘附分子Cadherin、CD44等相连接,调节细胞-细胞,细胞-间质粘附性而影响恶性肿瘤细胞侵袭性等生物学行为。Ezrin首先于1981年被发现于鸡的肠上皮细胞的微绒毛,它主要集中于富含肌动蛋白的细胞微绒毛和细胞膜的皱襞中,并参与上皮细胞的膜动力学。Ezrin几乎存在于任何细胞,但在小肠、胃、肺、胰腺和肾组织中有较高的表达水平,在脾脏、胸腺淋巴结和骨髓中的表达水平中等,而在心脏、睾丸和肌肉中的水平较低。在生理状态下,Ezrin参与细胞表面结构如伪足、微绒毛等的形成,并参与细胞间及细胞与基质之间的粘附,信号传导和细胞运动。近年来的研究发现Ezrin在肿瘤发生、浸润和转移中也起到重要作用,Ezrin参与细胞的移动、信号传导以及细胞粘附等与肿瘤进展相关的环节。CD44分子基因定位于染色体11p13,有至少19-20个高度保守的外显子构成。CD44v6是主要的变体之一。CD44v6是一种细胞表面跨膜糖蛋白,分布极广,在许多上皮细胞和间质细胞长均有分布。作为细胞基质透明质酸受体,参与癌细胞与基质的粘附作用及淋巴细胞归巢,它们可以改变肿瘤细胞表面粘附分子的构成和功能,有利于癌细胞的扩散和转移。近来研究表明,CD44v6过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关,肺癌、乳腺癌和大肠癌等肿瘤中均出现CD44v6的高表达。细胞骨架蛋白Ezrin及细胞粘附分子CD44v6在肿瘤的发生及转移中的作用已为许多研究者探索,但两者在胃癌中的表达及临床分析结果并不统一,两者在胃癌中表达的相关性研究未见报道。而本研究旨在通过检测Ezrin、CD44v6在胃癌中的表达情况,比较分析它们与胃癌转移之间的相关性,以及两者联合检测的可能性,为胃癌转移、预后判断及临床治疗提供新的依据。方法:1标本来源本研究病例资料取自南京军区南京总医院2005年-2006年病理科存档的胃癌手术石蜡包埋标本,共53例,另取正常胃组织20例。2试剂与方法采用免疫组化方法进行检测。所有标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,免疫组化Envision染色。将制好的组织切片,经二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水后性免疫组化染色。采用高压锅高温抗原修复后,余步骤按试剂盒说明书进行操作。DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固。Ezrin鼠抗人单克隆抗体(稀释度为1:200)(克隆号3c12)购自NeoMarkers公司,CD44v6鼠抗人单克隆抗体(稀释度为1:200)购于福州迈新生物技术开发公司。3结果判断Ezrin在胞质内表达呈棕黄色颗粒,按染色强度和阳性细胞表达细胞数,参考Mathew等分级标准:(-):无表达;(+):＜50%细胞阳性表达或染色较浅;(++):≥50%阳性表达或染色较深。CD44v6以细胞膜有明确棕黄色为阳性细胞,采用半定量积分法,即根据每张切片的阳性细胞比例及着色深浅计分,着色细胞比例在1/3以下为1分,2/3以上为3分,两者之间为2分;着色程度,无着色0分,浅黄色1分,橘黄色2分,棕褐色3分。根据两者乘积判断等级,0分为(-),1～4分为(+),大于4分为(++)。4统计学方法采用SPSS11.0统计软件进行统计分析,采用x~2检验及Spearsman相关分析,P＜0.05认为有显著性统计学意义。结果:1.Ezrin在胞质中呈棕色颗粒,在肿瘤组织中呈局部或灶性至弥漫性分布,在正常胃粘膜中也有染色,呈弥漫分布。53例胃癌标本中Ezrin阳性30例,阳性表达率为56.6%,20例正常胃粘膜中Ezrin阳性6例,阳性率30%,经x~2检验两组之间差异有显著性,(P＜0.01)。CD44v6染色阳性细胞的胞膜和胞质可见深浅不一,染色强度不等的棕黄色颗粒,弥漫或散在分布,在正常胃粘膜中不染色。53例胃癌标本中CD44v6阳性31例,阳性率为58.5%。2.Ezrin的表达程度与胃癌的分化程度有关(P＜0.05),与临床分期、淋巴结转移及远处转移显著相关(P＜0.01)。CD44v6的表达程度与胃癌的分化程度无关(P＞0.05),与临床分期、淋巴结转移及远处转移显著相关(P＜0.01)。3.胃癌组织中Ezrin及CD44v6的表达之间呈显著正相关(r_s=0.740,P＜0.01)。结论:胃癌组织中Ezrin及CD44v6的高表达与胃癌的临床分期、淋巴结转移及远处转移有关,提示Ezrin和CD44v6与胃癌的进展有关,尤其是在胃癌的转移过程中发挥着重要作用,因此Ezrin和CD44v6的联合检测有望成为胃癌诊断及预后判断的有效指标。