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为了在细胞分子水平研究腺苷A1受体(adenosineA1receptor,A1R)和δ阿片受体(deltaopioidreceptor,DOR)的相互作用,我们构建了一个稳定共表达HA-A1R和DOR-CFP的CHO细胞株,并在这个细胞模型上使用了westernblot、放射性同位素标记、放射性配体结合实验等实验方法,检测了长期的A1R激动剂CHA处理对DOR介导的多个信号通路的影响,以及CHA是否会导致DOR自身发生磷酸化或下调。结果我们发现CHA的长期处理导致DOR在ERK、Akt和cAMP信号通路上都发生了异源脱敏,但脱敏的时程和程度不同。CHA时程依赖地抑制DOR激动剂DPDPE引起的ERK和Akt的磷酸化,使DOR在这两个信号通路上都发生了异源脱敏,CHA预处理10min后DPDPE激活的信号开始减弱,预处理1h后信号几乎被完全抑制。CHA预处理24h导致DPDPE抑制cAMP的量效曲线右移,与对照相比曲线的EC50显著增高,而EMAx没有发生统计学意义上的变化。CHA时程依赖地减弱DOR对胞内cAMP水平的抑制,脱敏半衰期t1/2=2.56(2.09-3.31)h。我们还发现CHA时程依赖地引起DOR异源磷酸化,但不引起DOR下调。CHA引起的DOR的异源磷酸化可以被选择性的A1R拮抗剂DPCPX完全阻断,但不能被DOR拮抗剂纳洛酮阻断,也不能被P13K/Akt、PKC或MEK的抑制剂所抑制。进一步的机制研究揭示了CHA引起的DOR在激活ERK上的异源脱敏可以被U0126和DPCPX抑制,提示负反馈是ERK异源脱敏的机制之一。之后我们发现CHA和DPDPE都是通过Raf-1激活ERK,长期的CHA作用导致Raf-1-ser289/296/301磷酸化,抑制DOR介导的Raf-1和MEK的激活,说明Raf-1的活性调控在CHA和DPDPE介导的ERK激活和脱敏中起着重要的作用。长期的CHA引起的Raf-1-ser289/296/301磷酸化可以被U0126抑制,并且U0126也可以抑制ERK信号脱敏时Raf-1-ser289/296/301的磷酸化,并同时抑制Raf-1/MEK/ERK的异源脱敏,说明CHA可能是通过激活ERK,负反馈磷酸化Raf-1-ser289/296/301,抑制Raf-1的活性,从而使Raf-1/MEK/ERK信号通路异源脱敏的。总而言之,我们发现了激活A1R会导致DOR在ERK、Akt和cAMP信号通路上异源脱敏,激活A1R会导致DOR异源磷酸化,但不导致DOR下调。CHA可能是通过激活ERK,负反馈磷酸化Raf-1-ser289/296/301,从而使Raf-1/MEK/ERK信号通路异源脱敏。所以除了受体磷酸化之外,胞内信使分子的活性的变化也能导致DOR的异源脱敏。