慢性胃炎患者腻苔代谢及口腔微生物指纹图谱研究

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目的:探讨慢性胃炎患者腻苔形成过程中机体内的代谢物质和口腔微生态的变化;尝试从代谢物谱-微生物菌群指纹谱等多层次、多视角阐明腻苔形成的生物学基础。并建立适合舌苔的代谢组学液质联用(LC-MS)和微生态学变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法。   方法:收集慢性胃炎患者舌苔样本70例,其中腻苔组40例、非腻苔组30例;正常对照组20例。对所采集的舌苔样本经前期处理后,分别进行两部分实验:一是采用LC-MS检测各组患者舌苔中的代谢成分,得到代谢指纹总离子流图,进行主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别(PLS-DA)、正交偏最小二乘法判别(OPLS-DA)分析得到潜在代谢标志物,并利用Chemspider、HMDB网站检索,进行初步鉴定。二是利用16srRNA基因DGGE技术检测各组患者舌苔中的微生物菌群,得到舌苔样本细菌DGGE图谱,将其数字化后进行PCA和PLS-DA分析,找出各组间显著性差异的菌种。   结果:(1)各舌苔组代谢产物分析结果显示:慢性胃炎腻苔组、非腻苔组和正常组舌苔的代谢产物分布在不同区域内,有显著性差异。①腻苔组和非腻苔组之间差异的化合物有8个,推测可能为以下化合物:3-酮基乳糖、2-脱氧-D-核糖、UDP-D-半乳糖、变视紫红(质)、抗坏血酸盐、吡啶甲酸、组氨酸,其中还有1个未在数据库中查到。②腻苔组和正常组之间差异的化合物有8个,推测可能为以下化合物:3-酮基乳糖、UDP-D半乳糖、变视紫红(质))、白三烯A4、维生素D2,其中还有3个未在数据库中查到。③非腻苔组和正常组之间差异的化合物有8个,推测可能为以下化合物:前列腺素A2、焦磷酸盐、Piperideine-2-羧酸、17alpha-甲酸、核酮糖-1,5二磷酸,其中还有3个未在数据库中查到。(2)各舌苔组微生物菌群分析结果显示:慢性胃炎腻苔组、非腻苔组和正常组舌苔的微生物组成不同,有显著性差异。①腻苔组与非腻苔组之间有5条具有显著差异的条带,判别模型的准确率达到97.5%;腻苔组和正常组之间有8条具有显著差异的条带,判别模型的准确率达到95%;非腻苔组和正常组之间的条带差异不明显。②8号条带亮度腻苔组高于非腻苔组和正常组,可能与腻苔的形成有着密切的关系,是目前尚未报道的一个新种;10号条带亮度正常组〉非腻苔组〉腻苔组,可能与非腻苔形成以及健康状况都有一定的关系,测序结果显示其与Rothia mucilaginosa(粘滑罗斯菌)相似度达到100%。   结论:(1)基于LC-MS技术检测出的舌苔代谢物质主要参与能量代谢,与前期舌苔细胞生化研究结果相一致,说明机体三大物质代谢中糖代谢(能量代谢途径)的变化是腻苔形成的机制之一。(2)基于PCR-DGGE技术检测出的舌苔微生物菌群可能与舌苔表面氧含量有关,间接印证了代谢研究结果。(3)从细胞化学-代谢物谱--微生物菌群指纹谱等多层次、多视角阐明慢性胃炎腻苔的形成可能与糖的代谢密切相关,反应了“痰”、“湿”致腻苔的病理特点。
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