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目的:对广西产兰科植物毛唇芋兰Nerviliafordii(Hance)Schltr.即青天葵全草的药理活性部位化学成分进行提取、分离和纯化,并对分离纯化所得出的化学成分单体通过相关的光谱测试后进行解析,确定其结构;对其中含量较高的单体化合物——鼠李秦素(rhamnazin)进行了含量测定的研究。
方法:在化学成分研究方面,对青天葵全草进行系统成分预试验,了解其中含有的成分;用95%乙醇(食用)进行渗漉提取,回收乙醇,得浸膏,以系统溶剂分离法对浸膏进行部位分离,分为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇四个部位,再利用硅胶柱层析系统溶剂梯度洗脱法、C18反向柱色谱系统溶剂梯度洗脱法和重结晶法对其中的乙酸乙酯部位化学成分进行分离纯化,根据所得单体的熔点、溶解性以及通过测定相关的光谱如紫外、红外、电子轰击质谱、快原子轰击质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱(UV、IR、EI-MS、FAB-MS、1HNMR、13CNMR、DEPT)等的数据以及文献对照法对所分离得的单体进行解析,确定其单体化合物的结构。
在含量测定方面,采用RP-HPLC法测定药材中含量较高的鼠李秦素(rhamnazin)的含量。色谱条件:InertsilODS-3C18色谱柱(5μm,250mm×4.6mm);流动相:甲醇-0.4%磷酸水溶液(63∶37);检测波长:256nm;柱温为40℃;流速1.0ml/min。通过正交实验确定最优提取方案为:30倍量的75%乙醇,超声提取1.0h。
结果:从广西产的青天葵全草提取分离出的乙酸乙酯部位分离纯化出6个单体化合物,通过化学性质和光谱数据确定其中5个的结构,它们依次为:正亮氨酸(Norleucine,结晶Ⅰ)、24(S/β)-dihydrocycloeucalenol-(E)-p-hydroxycinnamate(结晶Ⅲ)、鼠李柠檬素又名泻鼠李素(rhanmocitrin,结晶Ⅳ)、鼠李秦素又名甲基鼠李黄素(rhamnazin,结晶Ⅴ)、胡萝卜苷(daucosterol,结晶Ⅵ)。用RP-HPLC法测定单体中含量较高的鼠李秦素,该方法可以使样品达到基线分离,鼠李秦素的保留时间约22min。此方法具有良好的精密度、重现性和稳定性,平均回收率为99.76%,RSD=2.86%(n=6);线性关系良好,相关系数为r=0.9999(n=5)。用同样方法测定了3批青天葵药材中鼠李秦紊的含量,在0.38%~0.40%。
结论:从广西产的青天葵全草乙酸乙酯部位中共分离确定6个单体化合物结构,已经确定结构的5个单体均为首次从该植物中得到。首次采用RP-HPLC法,快速,简单,无需对样品进行太多柱前处理,即可达到基线分离,测量结果准确,适用于青天葵药材中鼠李秦素的含量测定,为青天葵药材及制剂的质量控制提供依据。