黄绿蜜环菌凝集素的分离纯化、理化性质及其抗肿瘤活性的研究

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黄绿蜜环菌(Armillaria luteo-virens)是一种具有抗氧化及抗肿瘤活性的珍稀野生食用菌,为进一步研究其药用价值,以黄绿蜜环菌干子实体为材料,通过硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose阴离子交换柱层析、CM-cellulose阳离子交换柱层析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析和FPLC Superdex75凝胶过滤柱层析的方法,从黄绿蜜环菌干子实体中分离得到两个新的分子量相近的凝集素ALA(分子量为29.1 kD)和ALB(分子量为29.4 kD),ALA由两个不同亚基组成,其亚基分子量分别为15.0kD和14.1kD,ALB由两个相同的亚基组成,每个亚基的分子量均为14.7kD。 ALA和ALB的凝集活性能特异性地被菊糖所抑制,在12.5mmol/L以下的HCl,25mmol/L的NaOH和70℃以下的温度条件下凝集活性稳定。ALA和ALB的凝集活性受Fe<3+>、Al<3+>的强烈抑制,而不受Ca<2+>、Mn<2+>和Mg<2+>的影响。 黄绿蜜环菌凝集素ALA和ALB分别在一定程度上能够延长腹腔荷瘤(Sarcoma180)小鼠的生存期,减缓小鼠体重的增长速度,对实体瘤的增长有较强的抑制作用,在1μmol/L时表现出最大的促脾细胞有丝分裂活性,对肿瘤细胞如淋巴细胞白血病细胞株L1210、宫颈癌细胞株Hela、淋巴瘤细胞株MBL2表现出很强的细胞毒性,但对肝癌细胞株HepG2没有表现出细胞毒性。 采用悬滴蒸发法得到了ALA和ALB两个凝集素的晶体,利用3’RACE的方法克隆到了凝集素ALB的cDNA部分片断,大小为376bp,经蛋白比对表明,3’RACE产物蛋白的部分氨基酸序列和斑马鱼(Danio rerio)中预测的与丝氨素/脯氨酸激酶11相互作用蛋白的部分氨基酸序列的相似性为43%,和牛泰勒虫(Theileria parva)假设蛋白的部分氨基酸序列的相似性为35%。
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