【摘 要】
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犬瘟热（Canine Distemper，CD）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus，CDV）引起的一种以鼬科、犬科、海豹科、部分浣熊科等为主的食肉动物急性、烈性、高度接触性传染病。由于发病
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犬瘟热（Canine Distemper，CD）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus，CDV）引起的一种以鼬科、犬科、海豹科、部分浣熊科等为主的食肉动物急性、烈性、高度接触性传染病。由于发病急、死亡率高，给养犬业、毛皮动物养殖业及野生动物保护业造成巨大威胁。目前通过接种CDV弱毒疫苗，能够较为有效的预防该病，但是在我国某些地区，该病呈爆发趋势，经济损失非常严重。因此，为了避免免疫失败造成的犬瘟热爆发，对免疫前后动物血液中病毒中和抗体的检测是十分重要的。中和试验（SN）作为检测中和抗体的方法，存在对实验人员操作要求高、对实验环境要求严格、检测周期长、成本高等特点，酶联免疫吸附试验（ELISA）作为一种特异性强、敏感度高、操作简便的检测技术，在CDV抗体的检测上，有着良好的应用前景。本研究建立了基于原核表达的重组CDV H蛋白的间接ELISA检测方法，并将检测结果与中和试验（SN）结果进行比较，结果显示两种方法呈现一定的正相关性，该 ELISA方法在一定程度上可以体现血清中和抗体的水平。 本研究以犬瘟热病毒疫苗株CDV3基因组RNA为模板，RT-PCR扩增得到CDV3 H基因片段序列，连接到克隆载体pMD18-T中，转化E.coli DH5α菌株，经过筛选鉴定将正确的基因片段克隆至pET-30a（+）载体并转化宿主菌Rosetta（DE3），优化诱导表达条件，并进行SDS-PAGE鉴定、Western-Blot分析。结果表明犬瘟热病毒H基因片段在Rosetta（DE3）中能高效表达，并具有良好的反应原性，表达的目的蛋白分子量大约在51kDa。用纯化后的表达产物作为包被抗原建立检测犬瘟热病毒抗体的间接ELISA方法，确定抗原最佳包被浓度为1.71μg/mL，血清最佳稀释度为1:160，酶标抗体的最适工作浓度为1:4000。阳性标准初步判定为：OD450nm≥0.391。阻断试验、重复性试验和敏感性试验证明该方法具有良好的重复性、敏感性。与中和试验（SN）相比，该方法的符合率为90%。
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