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目的:糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy，DN)现已成为导致终末期肾脏病(end stage renal disease，ESRD)的主要原因之一，大量蛋白尿的发生是糖尿病肾组织损伤的典型标志，而足细胞损伤可导致肾小球滤过膜的完整性丧失和大量蛋白漏出，因此足细胞的完整性对DN蛋白尿的产生起重要作用。前期研究中我们以益气养阴消癥通络为DN的治疗大法，已经证实该法能够通过对DN大鼠TGF-β/Smads、氧化应激及RASS系统的影响发挥对DN的治疗作用。本研究继以高糖培养足细胞为研究对象，从细胞水平观察益气养阴消癥通络法对足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达的影响。 方法: 1、益气养阴消癥通络中药药物血清及正常鼠血清制备 健康雄性SD大鼠12只，SPF级，体重200-220g，由河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证编号1404079。将动物随机分为4组:正常组、低剂量药物血清组、中剂量血清药物组、高剂量血清药物组。正常组给予同等剂量的蒸馏水，其余三组根据Meeh-Rubner公式以低剂量组为临床半量、中剂量组为临床用量、高剂量组为两倍临床用量折算灌胃药物剂量，所用中药为中药提取颗粒，购自于河北医科大学附属医院河北省中医院中药房。各组每次灌胃剂量为2ml，灌胃给药每次间隔12小时，连续3d后末次灌胃2h后心脏取血，4500r/min离心机离心10min分离血清，56℃恒温水浴灭活30min，0.22um微孔滤膜过滤2次，-20℃冷藏备用。 2、小鼠足细胞培养及益气养阴消癥通络药物血清对高糖培养下足细胞的nephrin、podocin、CD2AP的影响 条件性永生化小鼠足细胞在33℃，γ-IFN存在的许可条件下培养传代后，在37℃，无γ-IFN的非许可条件下传代培养10-14天，促进足细胞分化成熟。分化成熟的足细胞随机分为6组:正常对照组(Normal Control，NC)、高糖对照组(High Glucose，HG)、正常鼠血清对照组(Normal Rat，NR)、低剂量药物血清组(Low dose of drug, LD)、中剂量药物血清组(Normal dose of drug，ND)、高剂量药物血清组(High dose of drug,HD)，NC组细胞给予培养基含有D-glucose5.5mmol/L+5％胎牛血清，HG组给予培养基含有D-glucose30mmol/L+5％胎牛血清，NR组给予培养基含有D-glucose30mmol/L+5％胎牛血清+5％正常鼠血清，LD组给予培养基含有D-glucose30mmol/L+5％胎牛血清+5％低剂量中药血清组，ND组给予培养基含有D-glucose30mmol/L+5％胎牛血清+5％中剂量中药血清组，HD组给予培养基含有D-glucose30mmol/L+5％胎牛血清+5％高剂量中药血清组。各组培养刺激24h后，收集足细胞应用细胞免疫化学法、western blotting、 Real-time PCR检测nephrin、podocin、CD2AP基因及蛋白的表达量。 结果: NC组与HG组比较，NC组nephrin、podocin、CD2AP基因表达量及蛋白含量均较HG组明显升高(P＜0.01);HG组与NR组比较，两组nephrin、podocin、CD2AP基因表达量及蛋白含量均未见统计学意义(P＞0.05);治疗组(LD、ND、HD)与HG组比较，治疗组nephrin、podocin、CD2AP基因表达量及蛋白含量均较HG升高(P＜0.05)，且nephrin、podocin、CD2AP基因表达量及蛋白含量与药物血清所用药物剂量呈正相关。 结论: 1、高糖培养的小鼠足细胞nephrin、podocin、CD2AP表达下调。 2、益气养阴消癥通络中药能明显上调高糖培养小鼠足细胞nephrin、podocin及CD2AP蛋白及mRNA的表达，证实益气养阴消癥通络中药可通过上调足细胞nephrin、podocin及CD2AP蛋白及mRNA的表达发挥对糖尿病肾病的治疗作用。