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背景与目的:双微体作为癌基因扩增的主要载体和主要细胞遗传学标记,见于多种类型的人类实体瘤。双微体携带多拷贝的癌基因对肿瘤演进、分级、预后有重要作用。本实验在前期工作中,通过Array CGH(comparative genomic hybridization)方法检测发现筛选出卵巢癌细胞系UACC-1598中19号染色体13.11-13.12区中6个高扩增基因(APLP1、LRFN3、FLJ36445、POLR2I、CAPNS1、ZNF146),我们将这6个高扩增基因从卵巢癌细胞系和临床组织病例样本中进行筛选,探究高扩增基因在人卵巢癌组织样本中差异性。再进一步分析表达差异较大(差异倍数≥1.5倍)的基因与双微体的相关性,这对于卵巢癌的早起诊断、演进、分级和预后有着重要的意义。 方法:首先培养人卵巢癌细胞UACC-1598然后进行核型分析,以确认双微体。再应用Array CGH对UACC-1598细胞系双微体进行分析,初步筛选最后确定19号染色体19q13.11-13.12上6个高扩增基因。然后通过半定量PCR及Real-time PCR方法分别从DNA和RNA水平对高扩增区域基因进行验证,及临床卵巢癌组织表达统计分析。最后应用T检验的统计学方法初步确定UACC-1598细胞19号染色体上高扩增基因及其在卵巢癌组织中的表达有统计学差异,对有上述差异意义的基因进一步通过FISH实验以检验该扩增基因是否存在于双微体上。 结果:通过ArrayCGH对UACC-1598细胞系双微体进行分析,初步筛选最后确定19号染色体19 q13.11-13.12上6个高扩增基因分别是CAPNS1、FLJ36445、ZNF146、POLR21、APLP1和LRFN3。然后对这6个基因以正常卵巢组织做对照从进行验证,得到六个基因CAPNS1、FLJ36445、ZNF146、POLR2I、APLP1和LRFN在卵巢癌UACC-1598细胞高表达,差异倍数分别为CAPNS1(1.56)、FLJ36445(1.06)、ZNF146(1.22)、POL R2I(1.64)、APLP1(2.00)和LRFN3(0.96)。再对CAPNS1、FLJ36445、ZNF146、POLR21、APLP1和LRFN3六个基因以正常人外周血做对照,ACTB为内参,得出其在卵巢癌UACC-1598细胞DNA水平上扩增倍数分别为CAPNS1(1.26)、FLJ36445(1.21)、ZNF146(1.18)、POLR2I(1.15)、APLP1(1。1)和LRFN3(1.40);最后将CAPNS1、FLJ36445、ZNF146、POLR2I、APLP1和LRFN3六个基因在87例组织(76例癌组织,11例癌旁组织)中mRNA在卵巢癌组织中进行表达验证,其高表达差异倍数分别为:APLP1(P=0.397)、FLJ36445(P=0.003)(T检验)。最后将有统计学意义的FLJ36445进行FISH检验,结果FLJ36445并不在双微体上。 结论:APLP1和FLJ36445基因在卵巢癌中特异性高表达,提示它们与卵巢癌的发生发展相关。