论文部分内容阅读
目的:树突状细胞(DC)介导的免疫耐受对维持机体免疫平衡有重要作用，而免疫耐受缺陷参与了溃疡性结肠炎(UC)的发病过程。青黛是治疗溃疡性结肠炎的有效中药。本实验研究青黛的有效成分靛玉红对小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)亚群分化的影响，探讨靛玉红调节树突状细胞在免疫耐受方面的作用机制。
方法:建立体外培养C57/BL6小鼠BMDC方法，加入脂多糖(LPS)刺激促进其成熟，CCK8法检测0-100μmol/L浓度范围内靛玉红靛玉红对BMDC的细胞毒性;分为LPS（-）组，LPS(+)组，LPS+靛玉红1μmol/L组，LPS+靛玉红5μ mol/L组，LPS+靛玉红10μmol/L组。48h后，瑞氏染色观察BMDC细胞形态的变化;流式细胞仪检测各组细胞表面标志CD86、MHC-Ⅱ的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素-12p70(IL-12p70)含量;Real-time PCR检测BMDC趋化因子受体-7(CCR7) mRNA表达。
结果:(1)流式检测培养至第8d的BMDC表面分子CD11c为90％，即BMDC纯度达到90％。
(2)靛玉红在0-100μmol/L浓度内，不同浓度靛玉红(0.39，0.78，1.56，3.13，6.25，12.5，25，50，100μmol/L)对BMDC的抑制率分别为5.47％，7.26％，8.68％，10.85％,10.03％,4.56％,11.7％,12.5％,3.94％。其中0.39μmol/L,12.5μmol/L,100μmol/L组OD值与阴性对照组比较无统计学差异（P＞0.05）;0.78μmol/L，1.56μmol/L，3.13μmol/L,6.25μmol/L，25μmol/L，50μmol/L浓度OD值与阴性对照比较有统计学差异(P＜0.05)。
(3)瑞氏染色显示LPS（一）组细胞无明显树突状结构，LPS(+)组细胞有明显树突状结构，LPS+靛玉红1μmol/L组，LPS+靛玉红5μmol/L组，LPS+靛玉红10μmol/L组与LPS(+)组比较，细胞树突状结构不明显。
(4)LPS(+)组细胞表面分子MHC-Ⅱ表达显著高于LPS(-)组（P＜0.05）;LPS+靛玉红1μmol/L组和LPS+靛玉红5μmol/L组与LPS(+)组比较，MHC-Ⅱ表达无统计学差异（P＞0.05），LPS+靛玉红10μmol/L组MHC-Ⅱ表达显著低于LPS(+)组(P＜0.05)，各靛玉红浓度之间无统计学差异（P＞0.05）。
(5)LPS(+)组细胞表面分子CD86表达显著高于LPS((一))组(P＜0.05);LPS+靛玉红1μmol/L，LPS+靛玉红5μmol/L组，LPS+靛玉红10μmol/L组CD86表达显著低于LPS(+)组(P＜0.05)，LPS+靛玉红1μmol/L组与LPS+靛玉红5μmol/L组比较，CD86表达有显著差异（P＜0.05）;LPS+靛玉红1μmol/L组与LPS+靛玉红10μmol/L组，LPS+靛玉红5μmol/L组与LPS+靛玉红10μmol/L组比较，CD86表达无显著差异(P＞0.05)。
(6)ELISA检测显示LPS(+)组细胞上清液中IL-10含量显著高于LPS（(一)）组P＜0.05）; LPS+靛玉红1μmol/L组、LPS+靛玉红5μmol/L组、LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清液中IL-10含量显著高于LPS(+)组（P＜0.05），且随着靛玉红浓度增加，IL-10含量呈剂量依赖显著性升高(P＜0.05)。
(7)LPS(+)组细胞上清液中IL-12p70含量显著高于LPS（(-)）组(P＜0.05);LPS+靛玉红1μmol/L组、LPS+靛玉红5μmol/L组、LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清液中IL-12p70含量显著低于LPS(+)组(P＜0.05);LPS+靛玉红5μmol/L组细胞上清液中IL-12p70含量显著低于LPS+靛玉红1μmol/L组(P＜0.05); LPS+靛玉红5μmol/L组与LPS+靛玉红10μmol/L组细胞上清IL-12p70含量无显著差异（P＞0.05）。
(8) Real-time PCR显示各组BMDC的CCR7 mRNA表达无统计学差异(P＞0.05)。
结论:(1)靛玉红在0-100μmol/L浓度范围内对体外培养BMDC无明显细胞毒性。
(2)靛玉红通过抑制BMDC发育过程中细胞树突状结构的形成、细胞表面分子CD86、MHC-Ⅱ表达，而抑制BMDC向成熟状态发育，从而诱导树突状细胞维持免疫耐受作用。
(3)靛玉红呈现剂量依赖性促进BMDC产生IL-10，抑制产生IL-12p70，这可能是青黛治疗UC的作用机制之一。