朊病毒病实验室检测方法的初步建立及朊蛋白功能的研究

来源 :中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhougang1020
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朊病毒病是一组侵害中枢神经系统的退行性疾病,其潜伏期长,病程短,整个病程大约持续半年至一年的时间,对人类生命构成很大威胁.这类疾病是由被称为"朊病毒"的慢性感染因子引起的.其主要组成成分是位于人第20号染色体短臂上的基因PrP编码的朊蛋白.此类疾病的主要特征包括海绵样变性、胶质增生以及神经元细胞丢失,不伴随有炎症反应.人类朊病毒病主要包括:库鲁病(Kuru)、克-雅氏病、新型变异CJD、GSS综合征以及致死性家族性失眠.为了鉴定中国汉族人群基因组中与朊病毒病发病相关的PrP基因特性,他们提取人外周血淋巴细胞DNA,采用PCR扩增并克隆了20例中国人PrP基因.经SSCP和DNA序列分析,结果发现3列正常中国人和一个怀疑患有散发性CJD的病人的PrP基因在第194位核苷酸发生了点突变,导致形成终止密码,另16列PrP基因序列与已发表的标准PrP基因序列相同.这一突变为国际上首次报道,提示在不同种族间PrP基因序列存在着差异.为了得到朊病毒蛋白以制备特异性抗体建立有效的免疫学诊断方法,他们以pGEX-2T为载体,构建了人PrP蛋白原核表达质粒.以此质粒转化大肠杆菌,并用IPTG诱导其表达.结果显示标准及突变Prp基因可有效地表达完整及缺损的PrP蛋白.Western蛋白转印试验证实,所表达的GST-PrP融合蛋白具有良好的免疫反应性.人PrP基因能在大肠杆菌GST融合蛋白表达系统中等到高效地表达.
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