鼻咽癌中RASSF2A基因的转录失活机制及其功能研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yu0426
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RASSF2是新近发现的RASSF家族成员,在多种人类肿瘤中因为启动子CpG岛DNA甲基化而失活。RASSF2A是RASSF2唯一具有相关CpG岛的转录异构体。 在本实验研究中,我们用Real time RT-PCR的方法检测了鼻咽癌细胞株及活检肿瘤组织,正常鼻咽细胞株及正常鼻咽组织中RASSF2A基因的转录表达水平,并用甲基化特异性PCR及亚硫酸氢盐测序的方法检测了上述样本中RASSF2A基因的甲基化状态,我们发现在80%的鼻咽癌细胞株中RASSF2A转录表达下调,鼻咽癌组织中RASSF2A的转录表达水平亦显著低于正常鼻咽组织中的水平;RASSF2A基因启动子CpG岛高甲基化可在80%的鼻咽癌细胞株及50.9%的原发肿瘤中检测到。RASSF2A基因在正常鼻咽上皮细胞株及正常鼻咽组织中则全为非甲基化。在鼻咽癌组织中,甲基化的病例其转录表达水平显著低于非甲基化病例。这些结果说明RASSF2A基因转录表达水平相关,我们进一步用甲基转移酶抑制剂5-aza-dC处理RASSF2A失活的鼻咽癌细胞株,发现5-aza-dC能完全恢复这些细胞中RASSF2A的转录表达,说明启动子CpG岛甲基化是鼻咽癌中RASSF2A转录表达失活的直接原因。 我们还发现有淋巴结转移的鼻咽癌患者中RASSF2A甲基化频率显著高于无转移的患者,提示RASSF2A与鼻咽癌的浸润转移相关。 为明确RASSF2A在鼻咽癌中的作用,我们从正常人淋巴细胞中克隆出RASSF2A基因,构建其真核表达载体,并将其转染鼻咽癌细胞并筛选获得了稳定转染RASSF2A的鼻咽癌细胞株。生长抑制实验、克隆形成实验及转染后细胞周期分析与及肿瘤细胞迁移运动试验的结果显示,RASSF2A可抑制鼻咽癌细胞生长,降低鼻咽癌细胞克隆形成效率,并将鼻咽癌细胞周期阻滞于G0/G1期,此外,RASSF2A可抑制鼻咽癌细胞的迁移运动能力。 我们的结果说明RASSF2A在鼻咽癌中因为启动子CpG岛DNA甲基化而失活,RASSF2A可抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为及抑制鼻咽癌细胞的迁移运动,是一个鼻咽癌相关的潜在肿瘤抑制基因。
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