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以重组人leptin作为抗原,利用杂交瘤技术成功制备了3株鼠抗人leptin McAb,对其性质进行了系统的分析,并对其在诊断中的应用进行了初步探索。 3株特异性较好,效价和亲和常数较高。3株McAb均为IgGl亚类,ELISA检测腹水效价为10-6~10-7,特异性较好,亲和常数(Ka)分别为1.67×109L/mol,3.0×108L/mol,7.5×108L/mol。 采用常规的免疫方法制备了兔抗人leptin多克隆抗体,特性分析表明特异性较好,效价较高。经DEAE-FF纯化后的血清,用过碘酸纳法与辣根过氧化物酶进行了标记,方法学结果表明,标记后的酶标抗体质量较好。 以单克隆抗体作为固相抗体,多克隆抗体为酶标抗体,建立了一种检测人血浆中leptin的双抗体夹心酶联免疫吸附分析方法(ELISA)。此法的灵敏度为16ng/ml,批内变异系数为8.36%(n=10)批间变异系数为10.22%(n=5),测得回收率为92.8~106%。