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椭圆叶花锚Halenia elliptica D.Don.是藏药中最具特色的治疗肝胆系统疾病的植物,药效独特,目前对其化学成分的研究主要集中在酮类、萜类及生物碱类化合物,对其多糖的研究甚少。然而多糖作为一种生物活性物质,在诸多方面有着重要作用,特别在医学方面应用更为广泛。椭圆叶花锚作为西部地区草药,带有浓厚的民族特色,同时还有悠久的传统民族医药理论可借鉴,因此,对其多糖的研究有极大的应用价值。
本文从椭圆叶花锚中提取出水溶性粗多糖(简称HMc),测定HMc的理化性质,然后对HMc进行分离纯化,并测定纯化多糖HM41的结构,最后对初步纯化的HM及纯化的HM41进行体外清除自由基活性研究。研究结果可为进一步探索椭圆叶花锚多糖的药理活性,合理利用这种植物资源提供依据。实验分析结果如下:
正交试验分析得到HMc最佳提取条件为.A3B3C2(1:10,80℃,1.5h)。理化实验测得HMc蛋白质含量为5.59％,总糖含量为28.75％,糖醛酸含量为13.75％。
HMc经脱色脱蛋白得到初步纯化的HM,HM经酸性乙醇分级得到HM1、HM2、HM3、HM4。HM4经DEAE-SephadexA-25柱层析纯化,得多糖HM41。HM41经SepharoseCL-4B柱层析检测呈单一对称峰,纸层析检验呈单一斑点,醋酸纤维薄膜电泳呈单一谱带,表明HM41在分子量大小和极性上都均一,为纯化多糖,平均分子量约为1万。
HM41经GC分析表明单糖组成为鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)。摩尔比为Rha:Ara:Xyl:Man:Gal:Glc=1.0:5.5:1.8:3.0:9.4:21。
除GC分析外,还采用了XRD、IR、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化及其产物GC-MS、NMR等方法对HM41的结构进行分析。结果显示,多糖HM41为有分枝结构,主链由Gal和Glc构成,其中Gal主要以β-(1→4)糖苷键连接,β-(1→4)糖苷键在6-O处有分枝,平均每23个糖残基有4个分枝;Glc主要以β-(1→4)及β-(1→6)糖苷键连接,β-(1→4)无分枝,β-(1→6)在3-O处有分枝,平均每14个糖残基有9个分枝。支链由Rha、Ara、Xyl、Man、Glc构成,其中Rha以1→3,6连接,Ara以1→4或1→5连接,Xyl以1→4或1→5连接,Man以1→4,6连接,Glc以1→2连接。Ara、Xyl、Man、Gal、Glc都有一部分构成分子的末端残基。
清除自由基实验表明,椭圆叶花锚多糖具有较强的清除·OH、O2-·的能力,清除率与多糖浓度成正相关性,且总趋势HM41>HM,说明椭圆叶花锚多糖是一种良好的·OH、O2-·清除剂。