经典瞬时受体电位Ⅰ型通道（TRPC1）在SHR左室肥厚发生发展中的作用

• 作 者: 邹光荣
• 出 处: 福建医科大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 左室肥厚 自发性高血压大鼠 经典瞬时受体电位通道 替米沙坦 环孢素A

左室肥厚（left ventricular hypertrophy, LVH）是高血压病的常见并发症，被视为是猝死、心力衰竭等心血管事件的独立危险因素。先前研究表明，在基因敲除和动脉缩窄的大鼠左室肥厚动物模型上，经典瞬时受体电位Ⅰ型通道（transientreceptor potential canonical type1channels, TRPC₁）参与了其LVH的发生发展。本研究采用自发性高血压大鼠（SHR）左室肥厚模型，首先动态研究不同周龄TRPC₁表达及SHR左室肥厚发生发展之间的关系，再研究TRPC₁通路下游信号分子：钙调磷酸酶（calcineurin, CaN）、激活T细胞核因子-3（nuclear factor of activated Tcells-3, NAFTC3）的表达变化，以期研究TRPC₁、CaN、NFATC₃表达在SHR左室肥厚发生发展过程中的作用；并研究替米沙坦（telmisartan, Tel）干预TRPC₁表达和环孢素A（cyclosporinA, CsA）抑制CaN后SHR左室肥厚的变化，进一步证实TRPC₁参与了SHR左室肥厚的发生发展。第一部分不同周龄SHR左室TRPC₁表达的动态变化目的：通过研究TRPC₁随SHR周龄增加的动态变化，探讨TRPC₁是否参与SHR左室肥厚的发生发展。方法：32只雄性SHR为实验组，随机分为4周龄组、8周龄组、12周龄组、18周龄组等亚组（n=8），相同周龄雄性Wistar-Kyoto （WKY）大鼠作为对照组（n=8）。分别测量收缩压（SBP）、体重（BW）、室间隔厚度（IVS）、左室后壁厚度（LVPW）。测定心脏质量（HW）和左心室质量（LVW），并计算左室质量指数（LVMI）。Real-time PCR、免疫组化和western blot分别检测TRPC₁、CaN、NFATC₃的mRNA转录和蛋白表达。p-NFATC₃蛋白表达用western blot测定，计算p-NFATC₃/NFATC₃比值。结果：1血压：SHR组SBP随着周龄的增加而显著升高（ρ<0.05），4周龄SHR组与WKY组SBP无明显差异性（ρ>0.05），但8周龄起SHR组SBP均显著高于同周龄WKY组SBP（ρ<0.05）。2左室肥厚：SHR组IVS、LVPW随着周龄的增加而增加（ρ<0.05），4周龄SHR*:国家自然基金（81170143）和福建医科大学重大科研项目计划课题资助（09ZD010）组与WKY组IVS、LVPW分别相比无明显区别（ρ>0.05），8周龄起SHR组IVS、LVPW分别显著高于同周龄的WKY组（ρ<0.05）。8周龄后SHR组LVMI分别明显高于同周龄的WKY组（ρ<0.05）。3TRPC₁、CaN、NFATC₃表达的变化：SHR组左心室TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA转录和蛋白表达随着周龄增加而增加，8周龄起SHR组均明显高于同周龄的WKY组（ρ<0.05），但8周龄-18周龄SHR组的p-NFATC₃/NFATC₃比值明显低于的WKY组（ρ<0.05）。结论：8周龄的SHR发生左室肥厚的改变并随周龄增加而加重；在SHR左室肥厚的发生与发展过程中，TRPC₁及其下游分子CaN、NFATC₃表达逐渐上调，说明TRPC₁与SHR左室肥厚的发生与发展相关。第二部分干预TRPC₁和CaN的表达对SHR左室肥厚的影响目的：研究替米沙坦和环孢素A干预后，SHR左室肥厚与左心室TRPC₁、CaN、NFATC₃的表达的变化，进一步探讨TRPC₁是否参与SHR左室肥厚的发生发展。方法：8周龄雄性SHR随机分为5组（n=8），分别为：SHR组、替米沙坦组（8mg/kg.d,T组）、氨氯地平组（10mg/kg.d, A组）、低剂量环孢素A组（1.25mg/kg.d, LC组）、高剂量环孢素A组（5mg/kg.d, HC组）。选8周龄雄性WKY大鼠作为对照组（n=8）。干预10周后，测定大鼠体重（BW）、收缩压（SBP）、室间隔厚度（IVS）、左室后壁厚度（LVPW）。测定心脏质量（HW）、左心室质量（LVW）、计算左室质量指数（LVMI）。Real-time PCR、免疫组化和western blot分别检测TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA转录和蛋白表达。p-NFATC₃蛋白表达用western blot测定，计算p-NFATC₃/NFATC₃比值。结果：1血压：SHR组SBP显著高于WKY组（ρ<0.05）。与SHR组比较，T组和A组SBP显著降低（ρ<0.05），LC组SBP无明显变化（ρ>0.05），HC组SBP显著增高（225.58±6.92mmHg vs.211.65±8.43mmHg, ρ<0.05）。2左室肥厚：SHR组IVS、LVPW明显高于WKY组（ρ<0.05）。与SHR组比较，T组和LC组IVS和LVPW分别显著降低（ρ<0.05），A组和HC组IVS和LVPW无显著变化（ρ>0.05）。SHR组LVMI显著高于WKY组（ρ<0.05）。与SHR组比较，T组和LC组LVMI分别明显降低（ρ<0.05），而A组和HC组LVMI无明显变化（ρ>0.05）。3TRPC₁、CaN、NFATC₃表达的变化：SHR组左心室TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA转录和蛋白表达分别显著高于WKY组（ρ<0.05），而p-NFATC₃/NFATC₃比值显著低于WKY组（ρ<0.05）。与SHR组比较，T组TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA转录和蛋白表达表达明显降低（ρ<0.05），但p-NFATC₃/NFATC₃比值显著提高（ρ<0.05），A组TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA转录与蛋白表达及p-NFATC₃/NFATC₃比值分别与SHR组相比无明显变化（ρ>0.05）。与SHR组比较，LC组TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA和蛋白表达下降（ρ<0.05），p-NFATC₃/NFATC₃比值增高（ρ<0.05），而HC对TRPC₁、CaN、NFATC₃mRNA转录与蛋白表达及p-NFATC₃/NFATC₃比值分别与SHR组相比无明显变化（ρ>0.05）。结论：1替米沙坦不但能降压、改善SHR左室肥厚，而且也能下调TRPC₁、CaN、NFATC₃表达；氨氯地平能降压，但不能抑制SHR左室肥厚，对TRPC₁、CaN、NFATC₃表达无影响，说明TRPC₁在SHR左室肥厚的发生与发展过程中起重要作用。2低剂量环孢素A抑制CaN后，NFATC₃、TRPC₁表达下调，SHR左室肥厚改善，进一步说明TRPC₁可能参与了SHR左室肥厚的发生与发展；