【摘 要】
：
血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤血管新生过程中的重要因子，是抗血管新生的肿瘤基因治疗的重要靶点，本论文旨在建立和评估抑制血管内皮生长因子表达的锤头状核酶(hammerheadriboz
论文部分内容阅读
血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤血管新生过程中的重要因子，是抗血管新生的肿瘤基因治疗的重要靶点，本论文旨在建立和评估抑制血管内皮生长因子表达的锤头状核酶(hammerheadribozyme)技术系统，探讨该系统在抗血管新生的肿瘤基因治疗中可能的应用。
为了建立和评估抑制血管内皮生长因子表达的锤头状核酶技术系统，我们运用了如下技术手段：1，对VEGFl21基因mRNA序列进行二级结构分析，选择靶点；2，设计并构建针对VEGF的分泌肽mRNA的可表达锤头状核酶(1—4)载体系统和VEGF一荧光色素酶融合基因报告质粒；3，通过试管内切割实验等方法评估核酶对于试管内转录得到的VEGFRNA切割有效性和效率；4，通过瞬时共转染实验和稳定转染实验评估核酶在细胞内对于VEGFmRNA的切割效率；5，通过构建缺陷型腺病毒导入系统评估核酶在细胞内对于mRNA的切割效果；6，通过稳定表达核酶的细胞株的裸鼠成瘤实验评估抑制VEGF对于肿瘤形成和生长的作用。
研究结果显示：1，设计和构建了对VEGFl2lmRNA二级结构水平上的暴露区(+8，+36，和+71位点：核酶1，3和4)和非暴露区(+17：核酶2)四个锤头状核酶(1～4)质粒；2，试管内切割检测表明，针对+8，+36，和+71位点的核酶(1，3和4)可以有效地在试管内对VEGF121RNA进行特异性切割，使其水平分别降至对照的61．7％，27．6％和44．8％(荧光色素酶活性)或66．3％,27．0％和30．0％(蛋白质水平)；3，将核酶表达质粒与VEGF-LUC模板质粒瞬时共转染入SMMC一7721肝癌细胞，核酶1，3和4VEGF—LUC水平分别降低到对照的81．4％，56．6％和69．1％；4，稳定表达针对VEGF的核酶1，3或4的SMMC一7721细胞株中，内源性VEGFRNA的水平降至对照水平的5％；5，构建了复制缺陷型腺病毒核酶导入系统；6，稳定表达核酶的细胞株裸鼠成瘤实验显示，核酶3号可以抑制肿瘤的生长。
综上，我们构建的分别针对VEGFl2l+8，+36，和+71位点锤头状核酶可有效地抑制VEGF的RNA水平，针对+36位设计的锤头状核酶抑制效果最好。
其他文献
又到幼兒园的游戏时间啦，为了让大家交到更多的好朋友，老师今天想到了一个新的游戏分组办法，就是把跳绳都散在地上，小朋友们自己去选一根绳子的一端抓住，最后，拿住同一根跳绳两端的小朋友就是一组啦。请你帮忙看看他们到底谁和谁是一组的呢？ 加点料 1. 妈妈扫描二维码，宝宝学唱儿歌《找朋友》。 2.妈妈扫描二维码，和宝宝一起听故事《小北极熊找到好朋友》。 3.宝宝，上幼儿园这么久了，你有自己的好朋友
下雪了，无锡城空荡荡的街道上，只有一个人拄着拐杖在慢吞吞地走。“笃笃笃……”拐杖小心地在地上点着。他是一个盲人，大家都叫他阿炳。 雪天路滑，“扑通！”阿炳不小心摔倒了。他一把抱住自己心爱的二胡，摸索着躲到了一处屋檐下，坐下来歇了口气。雪越下越大了，簌簌声响个不停。阿炳倚着墙喘了口气，他搓了搓手，拿起了琴弓。 咿呀的二胡声响了起来。一开始，它还是轻轻的、慢慢的，好像轻声叹息，又如同回忆着往事。紧
中国养老保险制度改革虽然取得了一定的成效,但仍存在一些问题。其中养老保险双轨制的实施使机关事业单位职工与企业职工之间的养老金差距拉大,即影响了社会公平又阻碍人才的
应用齐次Ｍａｒｋｏｖ链仔细分析了标准遗传算法（ＳＧＡ）趋近于稳态的过程，给出其稳态分配的 具体表示形式；同时得到了更广泛和严格意义上的与ＳＧＡ控制参数相联系的到达稳态的速度估计。 其结果对于其他
本文分析了国内休闲旅游的山东省,总结了存在的问题,解决施工的麻烦,从信息网络,提高旅游交通系统设计,加强区域合作,并提出了发展措施。
This paper analyzes the domestic
目的:探讨视神经切断后视网膜外网层相关神经元功能活动及突触可塑性变化,以证实视神经切断后大鼠视网膜是否发生跨神经元的逆行溃变.方法:通过SD大鼠右侧眶上缘暴露视神经,
目的探讨腹腔镜根治术在早期宫颈癌中的临床应用效果。方法 100例早期宫颈癌患者,随机分为对照组和观察组,每组50例。对照组患者给予开腹宫颈癌根治术,观察组患者给予腹腔镜
哈利是一只有黑点的白狗.它什么都爱,就是不爱洗澡.有一天,不想洗澡的哈利溜到街上去玩.到了傍晚,脏兮兮的哈利竟变成了一只有白点的黑狗!为了让主人认出它来,哈利使出浑身解
上幼儿园已经快一个月了,你喜欢上课、玩游戏吗?老师请你帮忙的时候,你都能完成任务吗?上课的时候,小耳朵有没有在认真听呢?今天,鹿妈就来考考你们喽.仔细听二维码中鹿妈说的
找着北 《3-6岁儿童学习与发展指南》：社会——主动亲近和关心幼儿，经常和他一起游戏或活动，让幼儿感受到与成人交往的快乐，建立亲密的亲子关系和师生关系。 核心素养：人文积淀。 给 把 力 走遍天涯觅不到自己所需要的东西的人，回到家里就发现它了。 ——莫尔 加 点 料 1.根据孩子的适应情况决定荡毯子的频率和拎高的高度，让孩子保持愉悦感，富有安全感。 2.掃描二维码，欣赏《摇篮曲》