CBX2在骨肉瘤发生发展机制中的初步研究

• 作 者: 韩奇财
• 机 构: 郑州大学
• 出 处: 郑州大学
• 发表日期: 2019年7期
• 关键词: 骨肉瘤

目的：
　　研究CBX2在骨肉瘤组织中的表达情况及其与患者预后的关系；研究CBX2不同表达水平对骨肉瘤细胞侵袭、迁移等恶性细胞生物学行为及体内成瘤的影响，并探索其促进骨肉瘤进展的相关分子机制。
　　方法：
　　通过组织芯片和TCGA数据库分析CBX2在骨肉瘤患者中的表达情况及其与预后的关系；利用RT-qPCR和Westernblot技术检测CBX2在两株正常细胞：HFOB、HOBC，四株骨肉瘤细胞：MG63、U2OS、Well5、143B中的表达水平；通过RT-qPCR和Westernblot检测筛选有效的敲除CBX2siRNA靶点，研究不同表达水平对Well5和143B两株骨肉瘤细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的影响。并构建CBX2-sh-luciferase的敲除稳转株，构建骨肉瘤动物模型，利用活体成像检测CBX2在活体内对骨肉瘤进展的影响，并进行生存分析；通过RT-qPCR检测let-7a在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平，与CBX2的表达进行相关性分析；采用生物信息学分析miRNAlet-7a和CBX2存在靶向关系，采用荧光素酶报告基因、Westernblot等研究CBX2和let-7a的相互作用关系；构建CBX2过表达慢病毒和let-7amimic共转染，研究对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的影响。
　　结果：
　　通过组织芯片和TCGA数据库分析发现，CBX2在骨肉瘤组织中高表达，且与肿瘤的复发转移、化疗反应、TNMstage、预后生存相关。RT-qPCR和Westernblot显示与正常细胞相比，CBX2在骨肉瘤细胞中高表达；敲低CBX2能显著降低骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力，降低骨肉瘤在体内的形成能力。RT-qPCR结果证明let-7a在骨肉瘤组织和细胞中低表达，其表达水平与CBX2表达呈负相关；生物信息学预测和荧光素酶验证表明let-7a和CBX2存在靶向调控关系；转染let-7amimic和对照组相比，能显著抑制骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力，当转染let-7amimic同时CBX2过表达，能够逆转对骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力的影响。
　　结论：
　　通过本课题研究，明确了CBX2在骨肉瘤中高表达，且与骨肉瘤的进展和患者的预后密切相关，并初步探讨let-7a参与了CBX2在骨肉瘤中生物功能调控中的分子机制。