论文部分内容阅读
第一部分青少年特发性脊柱侧凸骨密度的研究
1.1 青少年特发性脊柱侧凸骨密度变化的分析
目的：对青少年特发性脊柱侧凸(adolescerlt idiopathic scoliosis，AIS)腰椎及股骨骨密度进行测量，以探讨AIS的骨密度变化规律。
方法：所有研究对象分AIS和正常对照两组：AIS患者的入选标准为年龄10～19岁，Cobb角25°以上，经临床检查和X线决定，并通过MRI证实。该AIS组101例，男性21例，女性80例，年龄10～19岁，平均(14.41±2.32)岁，Cobb角27°～134°，平均53°；对照组62例，男性15名，女性47名，年龄13～18岁，平均(15.02±1.58)岁。应用双能X线骨密度吸收仪(dual energy X-ray absorptiometry，DEXA)测定AIS患者腰椎(L2-L4)和股骨近端(股骨颈、大转子、Ward’s三角)的骨密度，结合脊柱侧凸严重程度进行分析，并与62名同年龄段正常青少年的骨密度进行比较。
结果：AIS所测腰椎及股骨近端的骨密度均明显低于正常对照组(p<0.05)，腰椎骨密度的降低比股骨明显，股骨近端的三个部位，以Ward’s三角的骨密度降低尤为显著。按诊断标准Z值为患者骨密度与正常同年龄对照组平均骨密度的差距，低于1.0SD以内为骨量正常，低于1.0SD～2.0SD之间诊断为骨量减少，低于2.0SD以上诊断为骨质疏松。AIS组所测的腰椎骨密度显示有26.7％的患者发生骨量减少，48.5％符合骨质疏松的诊断标准；股骨颈有26.7％的患者发生骨量减少，25.7％达到骨质疏松的诊断标准，大转子有20.8％的患者发生骨量减少，26.7％达到骨质疏松的诊断标准，Ward’s三角有31.7％的患者发生骨量减少，33.7％符合骨质疏松的诊断标准；但其骨密度的降低程度与侧凸严重程度无明显相关性。
结论：AIS患者存在着骨密度的降低，但与脊柱侧凸的严重程度无关，可能与特发性脊柱侧凸发病机理有关。
1.2 青少年特发性脊柱侧凸骨密度与血清IL-6的关系
目的：对AIS患者骨密度及血清白细胞介素6(IL-6)水平进行比较分析，以探讨血清IL-6与骨密度变化的关系。
方法：选择1.1研究中的A工S患者36例，男性6例，女性30例，年龄12～18岁，Cobb角34°～109°，且均为胸弯者；对照组为1.1研究中的对象36名，男性7例，女性29例，年龄13～18岁。骨密度测量同1.1，并用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-6水平。
结果：AIS组的腰椎(L2-L4)和股骨所测的三个部位的骨密度均明显低于正常对照组(p<0.001)，血清IL-6水平与正常对照组相比明显升高[(2.65±1.65)pg/mL vs(1.61±0.79)pg/mL，p<0.005]；且AIS组腰椎及股骨所测的三个部位的骨密度变化与血清IL-6浓度呈明显负相关(p<0.001)，正常对照组骨密度变化与血清IL-6浓度无明显相关性(p>0.05)。
结论：AIS患者存在着细胞因子IL-6的过量分泌，此可能是引起AIS病人低骨量的因素之一。
第二部分青少年特发性脊柱侧凸雌激素受体基因多态性的研究
2.1 雌激素受体基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸易感性的研究
目的：通过对AIS患者雌激素受体(ER)基因多态性的分析，以了解ER基因型在AIS中的分布规律，探讨其与AIS发病易感性的关系。
方法：本研究分两组，AIS组202例，男性17例，女性185例，年龄11～19岁，平均(14.96±1.98)岁，Cobb角25°～125°，平均48°，对照组174名，男性20名，女性154名，年龄12～19岁，平均(15.41±2.23)岁。应用限制性片段长度多态性(RFLPs)技术分析研究对象的ER基因的PeR扩增产物，经Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ内切酶酶切后，行琼脂糖凝胶电泳，其多态性分别用P和p(Pvu Ⅱ)及X和x(Xba Ⅰ)表示。并将所有AIS女性患者的身高、初潮时间、脊柱侧凸类型、Cobb角及Risser级别与其ER基因型进行分析。
结果：AIS组ER各基因型分布频率分别为PP 19.3％，Pp 45.5％，pp 35.2％，XX 26.7％，Xx 37.6％和xx 35.7％。 XX基因型在AIS及女性患者中的分布明显高于对照组(p=0.005)，且X等位基因呈现高表达(p=0.001)；PpXX基因型在AIS及女性患者中的分布频率明显高于对照组(p=0.036和p=0.049)，而这种趋向在男性患者中表现不明显(p=0.452)，ppxx基因型的分布频率却明显低于对照组(p=0.044和p=0.038)。AIS组的ER基因Pvu Ⅱ多态性与对照组比较，差异无显著性(p>0.05)。基因型XX在身高≥160cm和Cobb角≥40°的女性患者中的分布频率明显高于身高<160cm和Cobb角<40°者(p=0.001和p<0.001)，而与初潮时间、侧凸类型及Risser的级别无关。
结论：ER基因Xba Ⅰ多态性与AIS发病易感性有关，基因型XX可作为一项遗传学指标，用于筛选AIS的高危人群，且其与脊柱侧凸的严重性密切相关；而ER基因Pvu Ⅱ多态性与AIS无关。
2.2 青少年特发性脊柱侧凸雌激素受体基因多态性与骨密度的关系
目的：比较分析AIS患者ER基因多态性和其腰椎和股骨的骨密度，以探讨ER基因多态性与骨密度之间的关系，并探讨AIS发病的分子机制。
方法：选择2.1研究中测定骨密度的AIS女性患者92例，年龄10～19岁，平均(14.58±2.46)岁，Cobb角25°～105°，平均56°。ER基因Pvu Ⅱ和XbaⅠ多态性分析同2.1。骨密度测定方法同1.1。
结果：AIS患者的ER各基因型分布频率分别为PP 19.6％，Pp 46.7％，pp 33.7％；xX22.8％，Xx 33.7％，xx 43.5％。Xba Ⅰ中XX基因型在身高≥160cm和Cobb角≥40°患者中的分布明显高于身高<160cm和Cobb角<40°者(p<0.05)，而与初潮时间及Risser的级别无关；Pvu Ⅱ基因型的分布各组间无显著性差异(p>0.05)。XX基因型的腰椎、股骨大转子和Ward’s三角的骨密度明显低于xx型(p<0.05)；而PvuⅡ基因的各基因型与骨密度无关。PPXX基因型的腰椎、股骨大转子和Ward’s三角的骨密度较低，而Ppxx、ppxx基因型的骨密度偏高，差异有显著性(p<0.05)。
结论：AIS患者ER基因Xba Ⅰ多态性与其骨密度有关，PPXX基因型的骨密度较低，此有助于较早发现AIS中低骨量者，且XbaⅠ多态性也与脊柱侧凸的临床指标有关。
第三部分雌激素受体在青少年特发性脊柱侧凸骨组织中的表达
目的：通过检测AIS患者骨组织中雌激素受体α和β的表达情况，探讨其与脊柱侧凸发病可能存在的相关关系。
方法：全部病例分为两组：AIS组18例，男性3例，女性15例，年龄12～18岁，平均(14.4±1.42)岁，Cobb角40°～125°，平均60.1°；先天性脊柱侧凸(congenitalscoliosis，CS)组10例，男性6例，女性4例，年龄11～19岁，平均(15.4±2.59)岁，Cobb角37°～120°，平均63.3°。术中取髂骨，用RT-PCR方法检测所有研究对象骨组织中雌激素受体α和β的表达情况。
结果：AIS组和CS组的骨组织中ERα和ERβ的阳性表达率无显著差异(p=1.000)；AIS组中ERα mRNA和ERβmRNA表达的相对含量分别为1.239±0.084.和1.072±0.097，CS组为1.244±0.091和1.084±0.096，两组比较无显著性差异(p>0.05)；但AIS和CS患者ERβmRNA在骨组织中的表达与其Cobb角呈负相关(r=-0.613，p=0.007和r=-0.648，p=0.043)，而与侧凸类型及Risser征等临床指标无关，ERαmRNA的表达与Cobb角、侧凸类型及Risser征无关。
结论：AIS患者骨组织中ERαmRNA和ERβmRNA的表达可能不是引起AIS侧凸的主要原因，但ERβmRNA的表达可能对骨生长的调控作用较大，值得进一步研究。