中国荷斯坦奶牛耐热性状的RAPD标记研究

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奶牛的热应激(Heat Stress)是指奶牛机体受到超过本身体温调节能力的高温刺激,作用于垂体一肾上腺皮质系统而使机体引起的非特异性防御反应和特异性障碍在内的全身性适应症。当气温在5.0℃—24℃,奶牛处在最佳生理状态,当气温上升时,为了维持正常的体温,奶牛将降低采食量,导致产奶量下降10—25%,乳脂率及乳蛋白率下降,免疫功能下降,维持需要上升,产奶效率下降。本实验以中国荷斯坦牛为实验材料,利用公畜内半同胞相关法估算产奶量遗传力、耐热产奶量遗传力、红细胞钾遗传力分别是0.334、0.196、0.318。研究Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶的用量以及退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛较佳的RAPD反应体系:反应总体积为20μL,Mg2+浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物浓度为2μmol几,dNTPs浓度为400μmol/L,模板DNA浓度为100ng,PCR反应程序:94℃预变性2min→40cycles(94℃变性1min→38℃退火1min→72℃延伸1min)→72℃延伸5min。对154条S系列随机引物进行了RAPD-PCR扩增反应。筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞K含量和奶牛生产性能变化,筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记,即S463和S441所扩增的亮带可以作为耐热奶牛品种的两个遗传标记,S93扩增出的弱带可以作为不耐热奶牛品种的一个遗传标记。鉴于样本数量,初步可以作为中国南方奶牛耐热性QTL多态性的检测标记。
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