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目的:研究推拿手法对不同年龄段家兔骨骼肌急性钝挫伤后修复的机理及推拿手法干预的时间窗。
方法:1、用21只6月龄兔子和6只16月龄兔子通过下肢腓肠肌打击造模的方式,确定造成兔子骨骼肌钝挫伤模型的适宜参数。2、制作传感器来检测骨骼肌收缩的力量和产生位移。并制作手法测试仪,以保证实验过程中手法的同一性。3、通过正交实验设计,对54只6月龄兔子用不同手法参数组合治疗,以收缩力、收缩位移、肌酸激酶作为评价效应,选择出推拿手法治疗家兔急性骨骼肌损伤的最佳力-频率-时间参数组合。4、取6月龄雄性新西兰兔132只,计算机随机分为四大组:损伤观察组42只、常规治疗组42只、早期手法组42只和正常对照组6只。除正常对照组外均造模。损伤观察组、常规治疗组、早期手法组等三大组再随机分为7小组,每组6只家兔,目的是按照日期作一连续动态观察。从组织形态学、肌酸激酶、收缩力和收缩位移、电生理、细胞因子MyoD和IGF-Ⅰ等的变化,来探讨推拿手法对成年家兔骨骼肌急性钝挫伤后修复的机理研究以及手法干预的适宜时间窗。5、将16月龄雄性兔子18只随机分为三大组:损伤观察组、早期手法组和正常组。将年5月龄雄性兔子18只随机分为损伤观察组、早期手法组和正常组三祖。各组除正常组外均须造模。检测组织形态学、肌酸激酶、收缩力和收缩位移、细胞因子MyoD和IGF-Ⅰ等的变化来探讨手法对老年家兔的治疗机理。
结果:1、对于6月龄兔子,骨骼肌钝挫伤模型的适宜造模参数是:打击重量2kg,重物下落距离50cm,对于16月龄兔子,骨骼肌钝挫伤模型的适宜造模参数是:打击重量1.75kg,重物下落距离50cm。2、所制作收缩力、位移传感器可以精确反映出骨骼肌收缩的情况。手法动态测试仪可以用来对手法力和频率进行有效控制,保持手法的同一性。3、通过正交实验,认为对于家兔骨骼肌急性钝挫伤而言,2kgf(力)-140次/分钟(频率)-15分钟(时间)参数组合可以产生最大收缩力和收缩位移,使肌酸激酶(CK)值降至最低。4、从光镜HE染色切片情况看,两组治疗组修复情况均比观察组好,产生的胶原纤维数量都比观察组少;治疗组CK降低的整体效应比观察组好,常规治疗组和早期手法组之间无差异;两组治疗组均会明显改善骨骼肌收缩功能,增加收缩力,增大收缩位移。两组治疗组均可以明显增加MyoD和IGF-Ⅰ的含量。早期手法组较常规治疗组能将这一过程再提前,至16天时,两组治疗组的MyoD和IGF-Ⅰ的含量达到顶点。而观察组的MyoD和IGF-Ⅰ的含量仍持续上升;卫星细胞半定量计数显示:三组卫星细胞数量随天数均有明显上升,早期手法组最明显,常规治疗组其次,三组都在16天左右时卫星细胞数量达到顶点。5、从光镜看,从上面光镜的表现看,老年组的情况类似于成年组,与观察组相比,手法可以减轻纤维组织的增生的程度,这一点成年组的表现比较明显。老年正常组的卫星细胞数量少于成年正常组,但统计学上无差异。老年观察组和老年手法组的卫星细胞数量均大于老年正常组。成年观察组和成年手法组的卫星细胞增殖情况明显多于老年组。老年兔子正常组骨骼肌收缩力已经较成年兔子的收缩力减弱。手法组的收缩力比观察组的收缩力恢复要好。老年正常组兔子的骨骼肌收缩位移比成年正常组兔子小,手法组的收缩位移比观察组的收缩位移要大。老年兔子的骨骼肌中MyoD和IGF-Ⅰ含量比成年家兔少。成年兔在整个损伤修复过程中,MyoD和IGF-Ⅰ含量都会大量增加。而老年兔在手法干预的情况下,MyoD和IGF-Ⅰ含量仍然增加不多。
结论:骨骼肌钝挫伤模型接近临床实际情况;传感器可以对推拿科研产生巨大帮助;按揉法的2kgf(力)-140次/分钟(频率)-15分钟(时间)参数组合是治疗家兔骨骼肌急性钝挫伤的最佳手法参数组合;推拿手法可以改善胶原纤维增生的程度,但并不能在骨骼肌修复过程中完全达到再生以替代疤痕修复的形式;对于成年家兔推拿手法能加速卫星细胞增殖,促进损伤骨骼肌中MyoD和IGF-Ⅰ的大量释放。对于老年家兔,推拿手法不会引起MyoD和IGF-Ⅰ的大量释放。手法不会促进卫星细胞大量增殖;手法早期治疗组与常规治疗组相比,无显著差异。