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目的:肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)是调控肿瘤发展进程的“复杂网络”(complex network),其中细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的重塑对肿瘤的发生、发展侵袭和转移起重要作用。为探究寒证、热证大肠癌选择发生模式变化的相关性及纤维蛋白表达的差异,观察寒证、热证大肠癌组织肿纤维蛋白家族纤维蛋白 4(Fibulin4)、纤维蛋白 5(Fibulin5)和赖氨酰氧化酶(Lysyl oxidase,LOX)的表达情况,以寻找寒、热不同环境压力选择下,肿瘤机制发生方式的异同。方法:参照许汝福等各组例数不等的完全随机区段分组法,将156只Wistar大鼠(雌雄各半),分为空白组12只,寒模组36只,寒反证组36只,热模组36只,热反证组36只。寒模组予0℃冰水灌胃和10℃冷水泡浴造模;寒反证组:在寒模造模基础上加上反左金丸汤剂。热模组予30%乙醇和辣椒素0.9 mg·mL-1溶液造模;热反证组在热模造模基础上加入左金丸汤剂;空白组大鼠予生理盐水灌胃。实验第5周,抽取大鼠32只(空白组2只,其余各组6只)取材,检测寒、热造模情况。第6周,寒模组、寒反证组、热模组、热反证组大鼠予DMH溶液颈后皮下注射,25 mg·kg-1,1次/周,连续12次。由于辣椒素有抗癌作用,造癌期间热模组仅予30%乙醇溶液,寒模组则维持造模。所有大鼠予10 mL·kg-1,1次/日,连续38周。分别于29周、32周、35周、38周进行取材,观察寒证、热证大肠癌发生情况及Fibulin4、Fibulin5和LOX在空白组、寒模组、寒反证组、热模组、热反证组中表达差异。结果:1.寒模组、热模组大鼠的饮食、饮水、体重和外观体征均与《实用中医证候动物模型学》中对寒证和热证的症状描述相符。寒反证组、热反证组症状描述都有好转。寒模组、热模组SDH、LDH、Na+K+-ATP和Ca2+Mg2+-ATP活性有显著差异,寒反证组、热反证组SDH、LDH、Na+K+-ATP和Ca2+Mg2+-ATP与寒模组、热模组相都有改善。胃组织粘膜、肠组织粘膜改变符合寒证、热证,寒反证组、热反证组胃组织粘膜、肠组织粘膜趋于好转。表明成功建立寒证模型和热证模型,反左金丸、左金丸对寒证、热证有反证作用。2.建立寒证、热证大肠癌模型,通过观察病理切片可知,早期大肠癌发生时,寒反证组、热反证组肿瘤发生情况低于寒模组和热模组。寒模组肿瘤发生情况低于热模组。大肠癌发展到中期时,寒模组肿瘤发生情况进展较慢,热模组肿瘤发生情况进展较快。寒反证组、热反证组肿瘤进展逐渐加快。在后期时,寒模组与寒反证组、热模组与热反证组肿瘤发生情况相差不大。但寒模组肿瘤发生情况及病理程度却比热模组严重。3.对大肠癌组织进行免疫组化和Western Blot检测,结果显示Fibulin4、Fibulin5和LOX在寒模组和寒反证组、热模组和热反证组之间的表达差异在肿瘤早期较为明显,肿瘤后期寒模组、寒反证组、热模组和热反证组表达差异减小。4.反左金丸、左金丸对寒证、热证有反证作用,且在大肠癌早期能抑制大肠癌的发生。这与两者方剂的药性与配比存在一定关系。结论:1.寒证模型可以通过冰水灌胃加冰水泡浴的方法建立,热证模型可以通过辣椒素和乙醇混合液灌胃的方法建立。反左金丸、左金丸对寒证、热证有反证作用。2.构建寒证、热证大肠癌模型方法是可行的,经过病证结合,方证相应,探寻大肠癌在不同环境压力选择发生机制,为中医证候研究及肿瘤微环境影响下的发生机制提供可靠的动物模型经验。3.大肠组织僵硬度和肿瘤发生情况与寒证、热证不同内环境相关。寒模组肠组织表现出较高的硬度、脆性,纤维化增加,促纤维增生性特征表现明显。热模组则延迟出现肠组织的硬度、脆性等情况。4.反左金丸和左金丸对寒证和热证有反证作用,但其反证作用在后期减弱。肿瘤前期治疗效果较好,其效果与反左金丸和左金丸的药物配比关系密切。但是长期服用中药仍存在一定风险,且中药后期疗效甚微。